流式细胞仪FACS Melody上机问题求教

风萧易水

最近流式上机遇到机器补偿过度的问题，也可能不是，我想检测细胞FITC和PE两个通道的荧光表达情况的，阴性对照的细胞是既不带FITC也不带PE的，在上机过程中画十字门也没有问题，但是上单阳管FITC的时候细胞就往负轴飘，这时候我调电压也上不来，等到上实验组的时候，细胞还是继续往下飘，是机器自动补偿的问题吗？而且PE直方图的阴性细胞峰都不出现，是不是没收集到PE通道的信号？接着我就这样收集了细胞，用flowjo软件分析后，再经过手动补偿调节，看着是正常了，但是实验组的FITC+和PE+细胞占比不一样，是不是少收集了PE的信号导致的？麻烦各位老师帮忙解答，谢谢！

niwanmao

仪器上的这个分布情况，就意味着PE-FITC补偿过度了。
你后来在flowjo上的补偿是正确的。

至于后面你实验组，看你圈的是淋巴细胞，所有CD19应该有阳性细胞群才对，故目前的抗体只有整体位移，是否你的抗体出了问题？

风萧易水

niwanmao 发表于 2021-5-21 08:05
仪器上的这个分布情况，就意味着PE-FITC补偿过度了。
你后来在flowjo上的补偿是正确的。

是的老师，目前怀疑是抗体失效了，我想再买一支新的抗体试试。这台仪器应该是会自动补偿，即使不染抗体，仅仅FITC都会补偿过度。