PI+SYTO13双染1:1混合活死菌出现大量双阳性

linli

想请教一下大家，我在对乳杆菌染色时，为什么我用PI+SYTO13双染混合活死菌（活菌和死菌以1：1的比例混合，死菌为热致死（121℃，15min)),出现了大量双阳性细胞

活死混合菌双染

而同样用PI+SYTO13仅双染死细胞时，并无双阳性细胞出现

死菌双染

niwanmao

双阳性是damaged bacteria。
之前这个帖子4楼，站友附了一张文献上的图：
https://www.flowcyto.cn/bbs/foru ... =8282&pid=46670

linli

niwanmao 发表于 2021-5-29 23:10
双阳性是damaged bacteria。
之前这个帖子4楼，站友附了一张文献上的图：
https://www.flowcyto.cn/bbs/for ...

倪老师，我这个图一（双染活死混合菌）里，按道理不应该有双阳性出现呀，因为里面是按50%的死菌和50%的活菌混合的，理论上应该有50%的比例在SYTO+/PI-区域（active cells)，50%在SYTO-/PI+区域(dead cells)。
但是结果里SYTO+/PI-区域确实有50%，而SYTO-/PI+区域仅21.5%，其余分布在双阳性区域。
如果仅双染死菌，并不会出现双阳性区域，也就是说活菌的加入使得部分死菌表现出双阳性，这是为什么呀

niwanmao

linli 发表于 2021-5-30 11:15
倪老师，我这个图一（双染活死混合菌）里，按道理不应该有双阳性出现呀，因为里面是按50%的死菌和50%的活 ...

目前看来只能说明你用热处理的死菌，实际上还是有一半左右没有彻底死掉，只处于半死不活状态，所以出现在双阳区域。