皮肤流式上机堵

Jamiee

最近做皮肤流式，组织处理步骤是先用dispaseⅡ消化去掉表皮，然后剪碎用Ⅳ型胶原酶+DNaseⅠ消化真皮，处理成单细胞悬液后染色上机，上机之前用300目尼龙膜过滤，上机的时候细胞悬液并不浓，但是一上样本（高速跑）events/s就从2000多开始往下掉，1500，1000，700，500，300，100，最后掉到几十，导致收不到什么细胞，其他组织不会出现这个情况，只有皮肤，不知道有什么方法可以解决这个问题，请教各路大神

niwanmao

上机前的细胞有没有镜下观察过形态？按照你的描述，我觉得可能性最大的是皮肤细胞已经死了，释放出的DNA具有粘性，导致细胞上机后粘在管路里，所以流速逐渐降低。

Jamiee

niwanmao 发表于 2021-6-3 12:34
上机前的细胞有没有镜下观察过形态？按照你的描述，我觉得可能性最大的是皮肤细胞已经死了，释放出的DNA具 ...

镜下看是这样的，有很多长条状的比细胞大很多的东西，还不清楚是什么东西
最近在消化的时候将DNaseⅠ的浓度增大到了200ug/ml(400unit/ml)，染完色后又用含100ug/ml(200unit/ml)DNaseⅠ的FACS buffer孵育了15min，最后用含50ug/ml(100unit/ml)DNaseⅠ的FACS buffer清洗并重悬然后上机，发现流速还是会逐渐降低，但可能比之前下降的慢了些，不过问题还是没有彻底解决

Jamiee

Jamiee 发表于 2021-6-7 15:41
镜下看是这样的，有很多长条状的比细胞大很多的东西，还不清楚是什么东西
最近在消化的时候将DNaseⅠ的浓 ...

不知道怎么能让图片显示出来

niwanmao

Jamiee 发表于 2021-6-7 16:00
不知道怎么能让图片显示出来

在回复的时候，点击编辑器“高级模式”，然后再用工具栏上的图片按钮上传。

Jamiee

niwanmao 发表于 2021-6-7 16:59
在回复的时候，点击编辑器“高级模式”，然后再用工具栏上的图片按钮上传。 ...

niwanmao

Jamiee 发表于 2021-6-7 18:44

我怎么看着这里几乎没有有效细胞了嘛。
这些很像结晶体。
还是得从样本处理上下功夫，具体的消化方法，可参考：
最完整的实体组织酶消化指导手册
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html
(出处: 流式中文网)

Jamiee

niwanmao 发表于 2021-6-7 21:33
我怎么看着这里几乎没有有效细胞了嘛。
这些很像结晶体。
还是得从样本处理上下功夫，具体的消化方法，可 ...

细胞是很少
我再参考倪老师的这个消化方法试试有没有别的解决方法