PBMC固定破膜检测流式

缘yuan

请教各位老师关于胞内染色问题：两种实验方法对比：
1、使用未活化的PBMC先加封闭剂室温孵育，标记表面marker CD3、CD4、CD183、CD196，流式检测结果，CD3阳性率77%、CD4阳性率51%、CD183阳性率60%、CD196阳性率30%；
2、使用未活化的PBMC先加封闭剂室温孵育，再加固定破膜剂，最后标记CD3、CD4、CD183、CD196，流式检测结果，CD3阳性率75%、CD4阳性率49%、CD183阳性率100%、CD196阳性率100%；
这是为什么呢？固定破膜后也能检出表面marker？（固定破膜时间严格按照说明书操作的）、非特异性结合？固定破膜后胞内也表达？

niwanmao

固定破膜后，表面结合位点构象只要没被破坏，同样还是能结合上去，并不是说固定破膜后，表面的结合位点就全部都没了。

缘yuan

niwanmao 发表于 2021-6-17 13:36
固定破膜后，表面结合位点构象只要没被破坏，同样还是能结合上去，并不是说固定破膜后，表面的结合位点就全 ...

那CD183、CD196阳性率100%是为什么呀？不破膜检测表面阳性率没那么高，是非特异性结合吗？

niwanmao

缘yuan 发表于 2021-6-17 18:00
那CD183、CD196阳性率100%是为什么呀？不破膜检测表面阳性率没那么高，是非特异性结合吗？ ...

这个得看你的对照，是否有按照FMO对照设门？

缘yuan

niwanmao 发表于 2021-6-17 18:39
这个得看你的对照，是否有按照FMO对照设门？

这次没有做FMO，下次做来看看

缘yuan

niwanmao 发表于 2021-6-17 18:39
这个得看你的对照，是否有按照FMO对照设门？

谢谢老师