调节补偿后，细胞分群显示异常

sky_loney

大佬们求指点。我一般将阴性群划在10的3次方，阳性群划在10的4次方。本次进行单核细胞CD14——APC,CD160-PE染色，吞噬带有FITC标记的异物，该图为未进行补偿时的FITC单染，可见FITC串光到PE，尽可能将FITC的PE阳性区间细胞通过补偿消除，得图4，导致后续出现图5的异常分群，若不按图4进行补偿，则有大量FITC串光到PE，见图5。无法把串光部分调节到10的3次，但无法还望各位老师解答，该如何解决这个问题

niwanmao

像这种情况，最好的办法是将电压降低。电压过高，导致FITC极高位置的spreading error过大。

所以你们以前所谓的阴性设在10E3次的错误观念，务必纠正。从来没这样的规定过。设置电压的原则请见：
〖流式细胞仪优化〗电压
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5478-1-1.html
(出处: 流式中文网)

sky_loney

niwanmao 发表于 2021-7-12 07:32
像这种情况，最好的办法是将电压降低。电压过高，导致FITC极高位置的spreading error过大。

所以你们以前 ...

谢谢倪老师！但小白没看懂最佳电压的意思，老师能否再指点一二。首先，我现在用的是beckman的cytoflex，里面没有设置电压，只能通过调节增益，二者是等同的概念吗？第二，我这设置的增益已经非常低了，如图，再低是否有不好的影响，如果简单点来讲，就是把阴性群调节至10E1左右吗？

niwanmao

sky_loney 发表于 2021-7-12 13:17
谢谢倪老师！但小白没看懂最佳电压的意思，老师能否再指点一二。首先，我现在用的是beckman的cyt ...

对的，这台机器上就是调节增益。
可以继续调低。如果下不去，可考虑减少抗体用量。如果前述招数仍不行，就得考虑换仪器了。

sky_loney

niwanmao 发表于 2021-7-12 13:32
对的，这台机器上就是调节增益。
可以继续调低。如果下不去，可考虑减少抗体用量。如果前述招数仍不行，就 ...

请问老师，调电压，应该通过哪个样本进行调节电压？空白组，单染组还是样本组？根据我现在学习的流程，一般先用空白组上样，在APC、PE、FITC通道调节分群至10E3；再上单染组，检查两两样本间是否有串光，调节补偿；最后上样本检测。往往是最后检测样本，才发现出现两个群体。该流程是否需要优化。按您的建议调低电压，那应该先上样本看条件，再做补偿呢？还请老师批评指正

niwanmao

sky_loney 发表于 2021-7-12 15:00
请问老师，调电压，应该通过哪个样本进行调节电压？空白组，单染组还是样本组？根据我现在学习的流程，一 ...

你还是没仔细看我前面那个优化电压的链接。