CART流式检测设置是否合理？

juju0416

求问各位大神，我这边现在做CD19靶点的CART研发，之前流式检测是QC在做，现在我们自己捣鼓，完全懵的，不知这样设置检测是否合理？还有3个问题，1.day0加入transact激活后，day1测cd3表型突然会下降？请问这是什么原因2.收获day13，我的中央记忆细胞，一直没有向效应记忆细胞转移，这又是为何呢？
3.而且基本没有TEF,效应t细胞，这又是什么原因呢？

Sample	CD3+(%)	CD8+/CD3+(%)	CD4+/CD3+(%)	CD25+/CD3(%)	CD279+（%）	Tem(%)	Tcm(%)	Tef(%)	Tn(%)	CAR+(%)	CD19+/CD45+(%)
Day0  thawed aphresis	76.70	28.05	65.60	94.60	32.54	18.59	26.86	3.99	50.57
Day0  PBMC	56.47	25.44	71.18	15.67	32.23	8.56	22.97	5.61	62.86
day1  before transduction-1	20.91	22.66	72.36	82.20	28.88	10.37	14.29	13.43	61.90
day1  before transduction-2	26.29	25.68	70.37	84.80	28.94	10.58	17.38	9.54	62.5
day2	54.97	31.46	67.79	77.64	54.44	35.94	18.34	19.06	26.65
day3	71.76	28.11	68.22	86.74	71.06	3.92	52.53	3.05	40.50
day4	74.6	34.5	68.29	98.45	82.19	2.25	93.78	0.18	3.79
day5	98.07	41.56	59.66	95.81	42.11	0.40	96.23	0.08	3.29
day6	98.41	39.72	59.04	76.60	27.90	0.37	97.11	0.04	2.48
day10	98.31	41.88	58.49	54.47	57.29	12.99	80.88	2.30	3.84
day13	97.84	41.44	55.15	57.53	20.68	2.71	91.12	0.28	5.79	46.40	0.11
T  phenotype Panel
CD3	FITC
CD4	APC
CD8a	BV510
CD45RO	APC-cy7
CD62L	BV650
CD279	PE/Dazzle594
CD25	PE

niwanmao

1、你这里的transact是指什么东西？
2、CD3的表达率降低，是真正的降低？还是因为仅仅荧光强度降低，导致你们十字门设置错误？
3、由于不知道你们的对照设置和门设置是否合理，所以无法评判没有向效应记忆或效应T转换的真实性。

juju0416

niwanmao 发表于 2021-7-29 14:09
1、你这里的transact是指什么东西？
2、CD3的表达率降低，是真正的降低？还是因为仅仅荧光强度降低，导致你 ...

倪老师好，这个transact是美天旎的T细胞激活剂，含有CD3和CD28抗体。我不知怎么把流式结果图弄出来，好想让您帮我分析下，是否流式分析有问题。而且day0的血样流式CD25很高，不知什么原因。但是分离了pbmc测流式，cd25又正常了。

niwanmao

juju0416 发表于 2021-7-29 16:13
倪老师好，这个transact是美天旎的T细胞激活剂，含有CD3和CD28抗体。我不知怎么把流式结果图弄出来，好想 ...

CD3的检测，你那边有没有试过多洗涤几次后，再与CD3孵育检测？

11111

CD3表位肯定被磁珠上的抗体占了

一席繁荒

我们使用的是抗体激活，CD3前期培养都会有降低趋势，而且分群不明显，。随着培养时间的延长，会慢慢好起来