再次请教Th1和Th17的染色问题？

cellprobe

一 Treg:

多色染色：PerCP Cy5.5 CD4  +  PE-CD25 +  FITC-CD127

染色分析方法：先用CD4把Th细胞圈出来；然后寻找CD25+CD127-/low的Treg比例。

问题：需要设置：

1.空白

2.PerCP Cy5.5 CD4

3.PE-CD25

4. FITC-CD127

5 .PerCP Cy5.5 CD4 + PE-IgG + FITC-IgG

以上5组对照是吗？

二 Th1和Th17：

多色染色：PerCP Cy5.5 CD4  +  PE-CCR6 + FITC-CXCR3

染色分析方法：CD4+CCD6+代表Th17， CD4+CXCR3+代表Th1.

问题：需要设置：

1.空白

2.PerCP Cy5.5-IgG

3.PE-CCR6

4.FITC-CXCR3

5. PerCP Cy5.5-IgG + PE-IgG + FITC-IgG

以上5组对照？

核心问题是设置gate时候的对照是什么？谢谢！

niwanmao

Treg分析最重要的是CD25和CD127的设门，但两者组在一起，分群是清楚的，可设置两个FMO管设置：
FMO1：PerCP Cy5.5 CD4 + PE-CD25 + FITC-IgG
FMO2：PerCP Cy5.5 CD4 + PE-IgG + FITC-CD127
从荧光素来看，我个人不建议把CD127用FITC，因为荧光太弱了，建议改APC。


Th1和Th17，这三个标记分群都很好，无需对照。

cellprobe

niwanmao 发表于 2021-10-1 08:15
Treg分析最重要的是CD25和CD127的设门，但两者组在一起，分群是清楚的，可设置两个FMO管设置：
FMO1：PerCP ...

倪老师，Percp-Cy5.5-CD4，CD196-PE，CD183-FITC。但是CD196+CD183-和CD196-CD183+的分群为什么这么差啊？

niwanmao

cellprobe 发表于 2021-11-28 01:45
倪老师，Percp-Cy5.5-CD4，CD196-PE，CD183-FITC。但是CD196+CD183-和CD196-CD183+的分群为什么这么差啊 ...

这个补偿没调好

cellprobe

niwanmao 发表于 2021-11-28 09:01
这个补偿没调好

1. 细胞数目收集的少了？2. 电压对吗？3. 对照组设置的对吗？4. 补偿是没有调好。