B细胞体外培养

黄芋头

老师好~我们分选出来人的初始B细胞，体外培养，发现细胞总是不到48小时就死掉了，加了BAFF来培养，感觉细胞活性也不好，是不是还有其他办法可以激活B细胞，能让它活化呢？

闷油瓶

加点CD19可以吗

niwanmao

在文献Su KY, Watanabe A, et al. Efficient Culture of Human Naive and Memory B Cells for Use as APCs. J Immunol. 2016;197(10):4163-4176. doi:10.4049/jimmunol.1502193 上，我们找到了一个较好的初始B细胞培养方法 ：

将人B细胞(1–6×10E3) 接种在 6 孔板或 10 厘米的组织培养皿 中，细胞密度控制在 ~100个B细胞/平方厘米。这些培养板或培养皿预先用表达CD154的基质细胞（CD40L low 细胞系，参考Luo XM, Maarschalk E, O’Connell RM, Wang P, Yang L, Baltimore D. Engineering human hematopoietic stem/progenitor cells to produce a broadly neutralizing anti-HIV antibody after in vitro maturation to human B lymphocytes. Blood. 2009;113:1422–1431. ）接种过夜。

B细胞的培养基用R5培养基中培养「即RPMI 1640中加入5% 人血清、55 µM 2-巯基乙醇、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/ml 青霉素、100 µg/ml 链霉素、10 mM HEPES、1 mM 丙酮酸钠和 1% MEM 非必需氨基酸」，然后再加入重组人 IL-2（50 ng/ml）、IL-4（10 ng/ml）、IL-21（10 ng/ml）和 BAFF (10 ng/ml)，一般共培养8 天，除非另有他用。

B细胞培养体系的最终体积：6孔板为2毫升/孔，10厘米培养皿为6毫升/皿。

在培养第4天和第6天，通过在不接触孔底的情况下吸出一半旧培养基，并用预热的含有细胞因子的新鲜R5培养基替换。在一些实验中，如果需要培养超过8天时，在第8天将细胞转移到新饲养细胞上。

在量化初始B细胞增殖动力学的实验中，可对第0天的接种初始B细胞数量进行优化：
- 如果要培养4天，则初始B细胞接种密度推荐1×10E4/ml
- 如果要培养6天，则初始B细胞接种密度推荐2.5×10E3/ml
- 如果要培养8天，则初始B细胞接种密度推荐1×10E3/ml。