流式染色之后的荧光猝灭现象怎么解决

闷油瓶

为什么抗体染完细胞之后，荧光强度就随着时间的推移慢慢变弱了？新鲜的抗体为啥没有这个现象

特勒兮兮

抗原抗体结合是可逆反应，两者为非共价键结合不形成稳定的共价键，因此在一定的条件下会解离，若不能尽快地进行检测，建议使用固定液进行固定，如用4%多聚甲醛。

niwanmao

一方面是结合，另一方面是染色体系不利于抗体荧光素的长时间稳定。

苏沁沁

niwanmao 发表于 2021-8-18 12:11
一方面是结合，另一方面是染色体系不利于抗体荧光素的长时间稳定。

请教倪老师，染色体系是指什么？可以怎么优化吗？

闷油瓶

特勒兮兮 发表于 2021-8-18 11:24
抗原抗体结合是可逆反应，两者为非共价键结合不形成稳定的共价键，因此在一定的条件下会解离，若不能尽快地 ...

染完色的细胞用固定液固定？我用酒精固定过，荧光强度整体变弱了

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-8-18 12:11
一方面是结合，另一方面是染色体系不利于抗体荧光素的长时间稳定。

我染完色换成固定液体系了，还是不行，感觉是不是发生荧光猝灭了

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-8-18 19:30
我染完色换成固定液体系了，还是不行，感觉是不是发生荧光猝灭了

哇塞，酒精固定是不行的喽。用0.5％多聚甲醛