THP-1细胞流式PE-CD14 染色

zhouying123

有同学遇到过这种情况吗？空白管比样品管的PE荧光更高？这是什么情况呢？

niwanmao

请参考以前的帖子：

同型对照荧光比抗体强，咋办？阻断！
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html
(出处: 流式中文网)

scaleus

空白管和样品管是同一种细胞吗 还是分化到不同阶段的细胞

zhouying123

scaleus 发表于 2021-9-17 16:52
空白管和样品管是同一种细胞吗 还是分化到不同阶段的细胞

您好，我的空白和样品管是同一种细胞，唯一差异就是一个不染色，一个染了PE。
刚刚看了niwanmao老师分析的帖子，我现在认为是本身THP-1细胞的背景荧光太强，细胞本身的FC受体非特异结合？

zhouying123

niwanmao 发表于 2021-9-17 21:19
请参考以前的帖子：

同型对照荧光比抗体强，咋办？阻断！

谢谢老师您的回复，您的意思是我的thp1细胞本身背景荧光过高？空白管应该使用FC阻断剂去阻断背景荧光吗？

niwanmao

zhouying123 发表于 2021-9-18 10:39
谢谢老师您的回复，您的意思是我的thp1细胞本身背景荧光过高？空白管应该使用FC阻断剂去阻断背景荧光吗？ ...

空白管、同型对照管和实验管的处理步骤，要保持一致。
其次，先一起阻断再染色。
最后，禁止用空白管作为参照设门，空白管的作用是用于调节电压。设门的话，如是多色用FMO对照，单色用Fc阻断管（同型对照也可）。