PD-1表达检测

maww11

各位老师，我在使用BD Celesta检测人外周血T细胞的多个衰竭因子（PD-1/TIM3/TIGIT/LAG-3）检测时，发现实验样品的PD-1很奇怪，与FMO相比，有一部分T细胞信号值更低。理论上说不通。这是因为补偿不合理的缘故吗？非常感谢！

niwanmao

不知道你这两管，分别加了哪些抗体？

maww11

niwanmao 发表于 2021-9-22 19:36
不知道你这两管，分别加了哪些抗体？

您好老师，分别都染色了FITC-CD3，BV421-CD8，PE-TIM3，APC-CY7-TIGIT，BV786-LAG3。试验样品多染了APC-PD1，FMO没有染PD1。

niwanmao

maww11 发表于 2021-9-22 19:56
您好老师，分别都染色了FITC-CD3，BV421-CD8，PE-TIM3，APC-CY7-TIGIT，BV786-LAG3。试验样品多染了APC-P ...

可能是由于PD1 APC这个抗体存在比较强的扩散误差，你可以将PD1 APC/CD3 FITC、PD1 APC/CD8 BV421 的散点图放出来看看，是不是从阴性区域往阳性区域，呈现一个逐渐扩大的喇叭形？

maww11

niwanmao 发表于 2021-9-23 08:03
可能是由于PD1 APC这个抗体存在比较强的扩散误差，你可以将PD1 APC/CD3 FITC、PD1 APC/CD8 BV421 的散点 ...

是的，老师。确实有显著的扩散。这种情况有什么方法改善吗？

11111

显然其他通道的spread，导致apc通道阴性峰比较宽

半年y

spreading error

niwanmao

maww11 发表于 2021-9-23 09:47
是的，老师。确实有显著的扩散。这种情况有什么方法改善吗？

这个是抗体本身，也可能与多色荧光搭配有关。你可以单染看看，如果单染也不好，可能就得需要换抗体了。