检测CD8-ki67圈门问题

苏沁沁

请教各位老师，样品是从PBMC中ficoll后得到淋巴细胞，然后经过CD8磁珠阳选后得到CD8细胞。标记KI67检测增殖。
下面是两种机器圈的前向侧向，请问下哪个是正确的的？

niwanmao

苏沁沁 发表于 2021-10-22 08:56
有CD8信号，因为这是阳选后的。但是把所有CD8圈上后，Ki67比例太低，不同组别之间不好分析出差异 ...

我觉得，即使是阳选了，P1门是否也还是应该圈完整的淋巴细胞区域，如果CD8+T少，只是说明可能阳选效果差。至于无差异，是否能排查一下其它因素，是实验真的无差异还是某些因素影响或是分选没分好。

niwanmao

你需要在分选前，先用100ul样本，标记淋巴细胞标记CD3，反设门明确淋巴细胞位置，然后分选后，再上机，就可用之前定的位置进行分析。
否则，仅凭这么一个分群不清的图，无法帮你明确位置。

苏沁沁

niwanmao 发表于 2021-10-18 09:36
你需要在分选前，先用100ul样本，标记淋巴细胞标记CD3，反设门明确淋巴细胞位置，然后分选后，再上机，就可 ...

谢谢您的答复。这是ficoll后的再分选的样品，不能认为都是CD8吗？实验中也染了CD8，是有分明显的阳性分群的。

苏沁沁

niwanmao 发表于 2021-10-18 09:36
你需要在分选前，先用100ul样本，标记淋巴细胞标记CD3，反设门明确淋巴细胞位置，然后分选后，再上机，就可 ...

我们每次检测PBMC分型时，都是在一个实验模板下作的，fsc和ssc的值差不多是固定的；而且刺激后的淋巴细胞会有少量增殖，这部分增殖起来的细胞前向侧向是有变化的。

niwanmao

苏沁沁 发表于 2021-10-18 14:22
我们每次检测PBMC分型时，都是在一个实验模板下作的，fsc和ssc的值差不多是固定的；而且刺激后的淋巴细胞 ...

主要是背景杂乱，其它图也看不到，原始数据也没有，确实很难判断。

苏沁沁

倪老师您好，这是全部的图，麻烦您分析看看

niwanmao

苏沁沁 发表于 2021-10-21 10:11
倪老师您好，这是全部的图，麻烦您分析看看

第二个图P1门往下移，没有CD8+信号吗？

苏沁沁

niwanmao 发表于 2021-10-21 15:07
第二个图P1门往下移，没有CD8+信号吗？

有CD8信号，因为这是阳选后的。但是把所有CD8圈上后，Ki67比例太低，不同组别之间不好分析出差异

苏沁沁

niwanmao 发表于 2021-10-21 15:07
第二个图P1门往下移，没有CD8+信号吗？

beckman图中的gate您认为是什么呢？下级门也有明显的死活分群，ki67也很明显，但觉得不应该有这么高的增殖比例。