找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 728|回复: 8

[白血病免疫分型] 粒系非特异性荧光

[复制链接]
发表于 2021-10-18 17:09:32 | 显示全部楼层 |阅读模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有账号?加入流式中文网

×
请教站友有关非特异性荧光的问题。抗体相关信息:CD3 Alexa Fluor700(BD),用于胞内染色(骨髓样本洗涤-溶血-固定-破膜-染色-洗涤-上机)。流式图如下:
目标样本抗体组合:CD45/cCD3/cCD22/MPO






不知道CD3 A700的非特异结合为什么那么强,补偿问题吗?如果不是,如何消除呢?




对照

对照

目标样本

目标样本
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-10-18 20:38:05 | 显示全部楼层
不应该啊,非特异性也不应该比特异性荧光还强。抗体的货号和克隆号能否提供一下?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-10-19 10:30:59 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-18 20:38
不应该啊,非特异性也不应该比特异性荧光还强。抗体的货号和克隆号能否提供一下?
...

CD3 A700: BD,(cat)557943, (clone)UCHT1
CD22 PE: BD, (cat)652811
MPO FITC: BD,(cat)652821

65138709-hym_Tube_008_008.fcs.zip

595.28 KB, 下载次数: 3

原始文件

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-10-20 13:04:25 | 显示全部楼层
vtea 发表于 2021-10-19 10:30
CD3 A700: BD,(cat)557943, (clone)UCHT1
CD22 PE: BD, (cat)652811
MPO FITC: BD,(cat)652821

看了原始文件,确实很奇怪,完全违背常理。
有没有试过在别的机器上跑?有没有可能是仪器的通道设置出错了?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-10-20 13:41:51 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-20 13:04
看了原始文件,确实很奇怪,完全违背常理。
有没有试过在别的机器上跑?有没有可能是仪器的通道设置出错 ...

实验室只有Canto II能跑A700通道,其他A700的抗体做出来就没什么问题,的确非常奇怪。打算封闭一下样本,做单染再看一下
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2021-10-21 10:22:07 | 显示全部楼层
vtea 发表于 2021-10-20 13:41
实验室只有Canto II能跑A700通道,其他A700的抗体做出来就没什么问题,的确非常奇怪。打算封闭一下样本, ...

FcR的结果好像从没见到过这么高的。克隆号跟我们平时用的是一致的。
有没有重复过多次?多个样本?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2021-10-22 08:45:01 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-21 10:22
FcR的结果好像从没见到过这么高的。克隆号跟我们平时用的是一致的。
有没有重复过多次?多个样本? ...

昨天做了BSA封闭,增加4%PFA固定时间,然后还是有胞内粒系非特异性阳性。做过大概5例样本了,有AML, ALL,正常样本,正常的粒系上都有非特异性阳性,肿瘤来源的一例倒是没有。这个抗体做表面染色粒系上无非特异性荧光。
问了BD技术,说之前有单位反映APC-Cy7 CD3的非特异性结合强,提醒我这些科研试剂可能不适合做胞内。但是具体原因是什么,并没有说明。倪老师有兴趣的话,抗体带给你,帮忙看一下?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2021-10-22 10:31:42 | 显示全部楼层
vtea 发表于 2021-10-22 08:45
昨天做了BSA封闭,增加4%PFA固定时间,然后还是有胞内粒系非特异性阳性。做过大概5例样本了,有AML, ALL, ...

好的。
等于说是固定破膜后出现的是吧?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2021-12-1 10:14:43 | 显示全部楼层
更新一下这次非特异性染色的后续。继本实验室CD3-A700在粒细胞上有非特异染色后(破膜剂,BD 340973 Permealizing solution),送省人民倪老师友情帮测,结果:CD3在粒系无非特异性荧光。
经提醒,可能是破膜剂原因造成的非特异性荧光,咨询后换了BD新的破膜剂(641776 BD intrasure KIT),到货后严格按照说明书操作进行胞内染色,结果粒系依然有非特异性荧光

以上结果表明:某些抗体在某些破膜剂(或溶血素也有可能?)作用下,可能会有非特异性染色,具体原因未知,流式选择抗体和试剂时还是要多多注意防止采坑,如果在流式中文网能有个不好用抗体集锦就好了。

省人

省人

新破膜图1

新破膜图1

新破膜图2

新破膜图2

新破膜图3

新破膜图3
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-12-22 19:08

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表