小鼠脂肪组织巨噬细胞分析、设门

请叫我黄总

小鼠脂肪组织流式，胶原酶消化后，染色，上机。第一次分析（见第一次分析图），发现CD206可以分成3群细胞，并且信号最高的CD206+群都压边了，检查补偿（见补偿图），觉得没问题。

第二次分析（见第二次分析图），调整了去黏连设门的范围，发现这群CD206+信号很高的群少了很多，但是仍然有3群CD206细胞。
第三次分析（见第三次分析图），在FSC-SSC中减小设门范围，感觉CD206分群比较接近正常。
请问这样的调整合理吗？设门是否有问题？
谢谢！！！

请叫我黄总

这一群似乎是粒细胞？应该去除吧，感觉最后设门没问题

niwanmao

设门上看，第3次设门是可以的，之前的FSC大、CD206极高的，应该 是中性粒，但CD206可能并非真阳，而是非特异性假阳。可检查一下邻近通道补偿。

至于补偿矩阵，我对flowjo的补偿调节一直没有好感，就是因为从来不把CD分子和荧光素一起写在上面，很难从逻辑上去判断是否调节准确。从图形上看，感觉有些分子应该是存在过度补偿，但由于看不清荧光素 ，并且没有CD分子以及不同细胞群的颜色显示，故无法准确判断。

请叫我黄总

niwanmao 发表于 2021-12-12 09:50
设门上看，第3次设门是可以的，之前的FSC大、CD206极高的，应该 是中性粒，但CD206可能并非真阳，而是非特 ...

倪老师，我重新发一下我的补偿矩阵。其实我一直有个疑问，用微球做单染管，调补偿的时候，单染管达到横平竖直了，样品管却可能存在补偿过渡或不足，这时再以样品管为标准重新调补偿，那单染管的意义何在？到底以谁为标准？
另外，我把Flowjo的ACS文件上传到百度网盘了，您有空再帮忙看看，谢谢！

链接：https://pan.baidu.com/s/1Jh8LjU79YccgNuzvtnTsgA
提取码：0000

陈佳雷

文件失效了，再发一下，我来帮你处理看看？

liuruiluna

请叫我黄总 发表于 2021-12-16 14:41
倪老师，我重新发一下我的补偿矩阵。其实我一直有个疑问，用微球做单染管，调补偿的时候，单染管达到横平 ...

就是，如果没有这种做的还可以的单染管，用细胞做也是更乱，在这个基础上微调，会更容易一些。比没有就更好一些

niwanmao

请叫我黄总 发表于 2021-12-16 14:41
倪老师，我重新发一下我的补偿矩阵。其实我一直有个疑问，用微球做单染管，调补偿的时候，单染管达到横平 ...

去年的帖子，可能当时忽略过去了。 补偿矩阵确实有问题，存在一些负值。单染管用于自动计算补偿，在此基础上，再根据全染样本管最后微调，使得最终矩阵更容易调节。