分选液滴延时调节 机型：BD FACSAria 2

小白兔

各位老师好，调节液滴延时候 要在 Initial  和 Find Tune 都调节左边方框到最大值（接近 99%)  我这个波动特别大是为什么？是哪一步没有调整好。 求解答，谢谢各位老师。 （我把分选时拍的视屏放在优酷了，麻烦老师看下，另外 我分选的步骤我也上传附件了）最后分选的结果没问题，分出来的细胞阳性率95%以上，就是这个液滴延时出现特殊情况了。还有个问题我这个机子 在保证分选质量的前提下，再快能设置多少细胞每秒的速度。

hezeljgouc

看你的液流很稳，推测是因为检测液流的小激光器和液流没有很好的相交，导致部分液滴偏离激光检测不到，所以框内显示比例较低。在分选仓左边有一个金属棒一样的旋钮，可以调节激光的位置，在不点optical filter的时候调节到中心液滴最亮一般比较好，而在点了optical filter后，两个框里显示的比例的总和应该是100

niwanmao

drop delay不稳定，而分选结果还不错，是否跟偶发性有关？分选这方面我没做过，仅供参考。

至于该机子最高分选速度，在https://flow.usc.edu/faqs/sorting-faqs-2/ 上提到：分选的最大速度不超过drop drive frequency的 1/4。 高速分选每秒产生 85,000–100,000 个液滴。 低速分选每秒产生 30,000–50,000 个液滴。

mmbb2345

AriaII的dropdelay是自动校准的。第一仪器开机预热要足半小时。主液流先调整好，假如是70的分选喷嘴，从上往下第6滴卫星液滴融合。然后测液流的分选框点要居中。把小红激光调到最亮。

wxd

看一下液流在不开Sweet Spot的情况下是否稳定，理想情况下，参数调整合适的话，即使不开Sweet Spot，液流也是稳定的。如果没记错的话，在做液滴延迟的时候，Sweet Spot是不能打开的。还有一个可能是：在做液滴延迟的时候碰到了鞘液管，这个也有可能导致液流不稳定。

小白兔

hezeljgouc 发表于 2022-1-12 18:51
看你的液流很稳，推测是因为检测液流的小激光器和液流没有很好的相交，导致部分液滴偏离激光检测不到，所以 ...

好的 老师 我下次试试。

小白兔

wxd 发表于 2022-1-12 17:51
看一下液流在不开Sweet Spot的情况下是否稳定，理想情况下，参数调整合适的话，即使不开Sweet Spot，液流也 ...

老师  因为分选的细胞要培养，分选前会做无菌管路制备。前一天我把鞘液桶和DI水桶都拿酒精泡了一晚上消毒，分选当天是全新加鞘液。我看论坛有人说新加鞘液立马开机会导致液流不稳定，是不是跟这个有关啊。。
另外 按照操作手册上说，液滴延迟是在打开Sweet Spot 之后进行的啊。

小白兔

mmbb2345 发表于 2022-1-12 17:02
AriaII的dropdelay是自动校准的。第一仪器开机预热要足半小时。主液流先调整好，假如是70的分选喷嘴，从上 ...

好的 老师 我下次做的时候再试试 这些方法。

小白兔

niwanmao 发表于 2022-1-12 14:20
drop delay不稳定，而分选结果还不错，是否跟偶发性有关？分选这方面我没做过，仅供参考。

至于该机子最高 ...

老师 你这个链接里 是说是这一类的 分选机子，比如 高速流式分选机 或者 低速流式分选机 这一类的 分选速度不超过drop drive frequency的 1/4是吧，不是专门针对我这个机型的是不。
另外 我分选时候怕太快不准，速度才放的2000-3000个细胞/每秒，阳性细胞是10%左右。感觉速度太慢了，半个小时才得到35万的目的细胞。所以想找到一个速度最大化同时得到目的细胞纯度也很高的分选速度。

niwanmao

小白兔 发表于 2022-1-13 19:28
老师 你这个链接里 是说是这一类的 分选机子，比如 高速流式分选机 或者 低速流式分选机 这一类的 分选速 ...

这已经很不错了。再高速的话只能考虑新式的流式分选仪了。