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[流式相关软件] modfit分析细胞周期

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发表于 2022-1-19 00:10:50 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏5流星已解决
本帖最后由 黄豆豆 于 2022-1-19 00:36 编辑

各位大神好,被巨核细胞倍体困扰很久了,在论坛老师的帮助下纠错把PI的电压更换成了PE通道,我是用CD41-APC标记的巨核细胞,今天又重新做了一次,在Modifit上分析后感觉还是不对,是我的细胞收集的太少的原因吗,所以分析不出来倍体(培养的原代细胞。。每次只能取一点点)。我这次把AHW都选了,不过PI的A还是log,不是线性的,我用了W和H。还有老师说的粘连体我也没看到。原始文件和我分析的图附在下面了,求各位大神指导,每次原代细胞太来之不易了。。。老不成功对于流式新手来说太艰难了。
d7.fcs.jpg

Specimen_001_20220118 .rar

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fcs

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上次那个帖子你删了吗?上次的数据前两天粗看了下,后来忘记回复了。 那个数据上PI线性模式能看到倍体关系,但是由于缺少倍体参照物,所以无法确定是不是存在多倍体。 下次如果要做,可买点鸡红细胞或鳟鱼红细胞作为倍体参照物,然后确定巨核细胞的倍体组成。
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发表于 2022-1-19 00:10:51 | 显示全部楼层
上次那个帖子你删了吗?上次的数据前两天粗看了下,后来忘记回复了。
那个数据上PI线性模式能看到倍体关系,但是由于缺少倍体参照物,所以无法确定是不是存在多倍体。
下次如果要做,可买点鸡红细胞或鳟鱼红细胞作为倍体参照物,然后确定巨核细胞的倍体组成。

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组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2022-1-19 09:37:36 | 显示全部楼层
用FSC-A/FSC-H 散点图可以排除黏连体
[无门控] FSC-A _ SSC-A.png
[A] FSC-A _ FSC-H.png
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 楼主| 发表于 2022-1-19 20:21:26 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-1-19 13:43
上次那个帖子你删了吗?上次的数据前两天粗看了下,后来忘记回复了。
那个数据上PI线性模式能看到倍体关系 ...

倪老师晚上好,那个帖子是在别人帖子里的留言,我没删。好的,我尝试下,这次的数据您有空的时候能帮我看看吗?感谢
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 楼主| 发表于 2022-1-19 20:23:21 | 显示全部楼层
Merci 发表于 2022-1-19 09:37
用FSC-A/FSC-H 散点图可以排除黏连体

巨核细胞应该是大一点的,我感觉应该在红的那一群里..这样去,会不会把目的细胞也去掉了。。
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发表于 2022-1-19 20:34:57 | 显示全部楼层
你这里设门图,将PI-A和PI-H改为线性显示,就能进行拟合了。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2022-1-20 00:24:21 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-1-19 20:34
你这里设门图,将PI-A和PI-H改为线性显示,就能进行拟合了。

谢谢倪老师。还是不行,我在BD的机器上PE通道参数那   就不能选中那个log吧?都被压在线外了。。
rpt_Specimen_001_20220118 .fcs.jpg
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2022-1-20 09:03:02 | 显示全部楼层
黄豆豆 发表于 2022-1-20 00:24
谢谢倪老师。还是不行,我在BD的机器上PE通道参数那   就不能选中那个log吧?都被压在线外了。。
...

不应该啊,选择FSC大、CD41a和CD42b阳性细胞之后,线性呈现PI-A,应该是如下图的直方图分布。我现在暂时没Modfit,只能用R语言帮你绘制出分布情况,无法帮你拟合,但从图形分布上,很明显存在多个峰。
cell cycle.jpg
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 楼主| 发表于 2022-1-20 17:43:27 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-1-20 09:03
不应该啊,选择FSC大、CD41a和CD42b阳性细胞之后,线性呈现PI-A,应该是如下图的直方图分布。我现在暂时没 ...

谢谢倪老师,是不是我可以不用modfit软件,我自己找一个比如鸡血红细胞做为倍体参照,然后根据峰依次4N/8N这样的? 那个软件怎么试都不行
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发表于 2022-1-20 18:06:59 | 显示全部楼层
黄豆豆 发表于 2022-1-20 17:43
谢谢倪老师,是不是我可以不用modfit软件,我自己找一个比如鸡血红细胞做为倍体参照,然后根据峰依次4N/8 ...

可以不用的,因为以前没有modfit软件之前,都是在cellquest等软件上直接设门看比例的。modfit主要是根据曲线分布,进行拟合,然后算出相对比较客观的比例而已。

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