流式荧光淬灭

飞翔 · 发表于 2022-3-4 08:13:09

大家好，想问一下有什么方法可以是细胞表面结合的荧光淬灭掉，细胞内的荧光不受到影响，只想检测胞内的荧光信号

immunology1988 · 发表于 2022-3-4 15:27:33

收集的细胞直接破膜，再染色。

飞翔 · 发表于 2022-3-4 15:34:29

immunology1988 发表于 2022-3-4 15:27
收集的细胞直接破膜，再染色。

做的不是这种检测，做的是内化实验

Climber · 发表于 2022-3-4 15:49:03

只想检测细胞内的水平是吧，建议用共定位检测，看的清楚胞膜和胞质的表达情况

飞翔 · 发表于 2022-3-5 12:50:39

Climber 发表于 2022-3-4 15:49
只想检测细胞内的水平是吧，建议用共定位检测，看的清楚胞膜和胞质的表达情况 ...

不是，是想做抗体结合靶点后内化的检测，有人建议检测结合内化时，把还结合在表面的荧光淬灭了，内化到细胞内的荧光不受淬灭的影响，有这种方法或试剂吗

Climber · 发表于 2022-3-5 15:30:27

飞翔发表于 2022-3-5 12:50
不是，是想做抗体结合靶点后内化的检测，有人建议检测结合内化时，把还结合在表面的荧光淬灭了，内化到细 ...

抗体结合表面特异分子会导致该分子内化是吧，内化之后结合的抗体不会掉吗？
是不是可以对比固定后的细胞和不固定的细胞荧光的差异来反应内化的程度，减少的荧光就是由于内化导致的。至于您说的把表面荧光淬灭倒是没有见过类似的方案

niwanmao · 发表于 2022-3-5 15:36:15

飞翔发表于 2022-3-5 12:50
不是，是想做抗体结合靶点后内化的检测，有人建议检测结合内化时，把还结合在表面的荧光淬灭了，内化到细 ...

可试试台盼蓝，可淬灭很多荧光素。

飞翔 · 发表于 2022-3-7 09:48:16

niwanmao 发表于 2022-3-5 15:36
可试试台盼蓝，可淬灭很多荧光素。

按什么条件进行淬灭呀，

niwanmao · 发表于 2022-3-7 13:12:02

飞翔发表于 2022-3-7 09:48
按什么条件进行淬灭呀，

飞翔 · 发表于 2022-3-7 15:25:47

niwanmao 发表于 2022-3-7 13:12
可以参考Flow cytometric quantitative determination of ingestion by phagocytes needs the distinguis ...

好的，倪老师，知识储备太渊博了，基本都了解

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[标本处理] 流式荧光淬灭