如何判断流式结果中的阳性细胞

蹦蹦跳跳

才开始做流式什么都不懂，有很多问题请教。昨天做的预实验检测的TH17和TH1，做了同型对照的。用PE-IL17，FITC-IFY-gamma,APC-CD8,PE-CY5.5CD3,PMA、离子霉素和莫能霉素刺激。上机检测的时候实验室的老师说没法判断阳性细胞，说要做什么阴性对照？完全不明白他的意思，我做的是正常人的外周血。问他有没有染上色他说也不知道，搞不明白怎么回事？想问下是阳性是怎么判断的，实验室的老师的意思好像是不是不能确定阴性的边界。

niwanmao

蹦蹦跳跳 发表于 2011-7-5 09:08

                               
登录/注册后可看大图

才开始做流式什么都不懂，有很多问题请教。昨天做的预实验检测的TH17和TH1，做了同型对照的。用PE-IL17，FI ...

刺激好的话，在IL17和IFN-γ会出现一个独立的阳性峰，跟阴性峰分的很清楚，不需要阳性对照。
如果没出现阳性峰，就说明你没有刺激好。
如果有阳性峰，而你们的流式老师不会分析，说明他太局限于教条。

蹦蹦跳跳

还是没明白是什么意思？实验室老师的意思还想是不能确定荧光阴性范围。我看他是用二维图的，没见到什么峰值

蹦蹦跳跳

那又是怎么确定阳性峰和阴性峰的呢？

niwanmao

蹦蹦跳跳 发表于 2011-7-5 13:54

                               
登录/注册后可看大图

那又是怎么确定阳性峰和阴性峰的呢？

给你一幅我今天做的图片做解释参考，你可以看到IFN－γ的阴性峰和阴性峰分开很明显，中间这个最凹处就是设置MARKER界限的地方，根本不需要什么阳性对照来设置。
IL-4虽然表达比较低，但是还是很明显看出其阴性和阴性之间的界限。
如果你刺激不出阳性峰（即M1里面那个峰），那说明刺激方案有问题，或者是抗体有问题，或者是检测有问题。

IL-4和IFN-r结果

蹦蹦跳跳

我看你做的TH1/TH2，可不可以说下你具体操作步骤，和你PMA，离子霉素加的量，谢谢！

niwanmao

蹦蹦跳跳 发表于 2011-7-5 19:06

                               
登录/注册后可看大图

我看你做的TH1/TH2，可不可以说下你具体操作步骤，和你PMA，离子霉素加的量，谢谢！ ...

http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =1061&fromuid=1