Naive CD4T刺激分化Th2

Oitr

请问大家，有做过naiveCD4+T刺激分化为Th2的小伙伴吗，我用的CD3/CD28 2ug/mL, IL-4 10ng/mL, IL-12 10ng/mL和anti-IFNγ 10ng/mL 一直都刺激不出来，我听有经验的老师说Th2很难刺激，最高也就5-10%。我做了很多次，也换了磁珠、换了细胞因子品牌和浓度一直都做不出来，我实在找不到原因了，谢谢大家指教。感谢倪老师提供的平台。

niwanmao

是做人的还是小鼠的？
可以参考我们有一次聚会时的技术PPT：
第20次线下聚会PPT：人、小鼠、大鼠Th1/Th2/Th17条件优化
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8047-1-1.html
(出处: 流式中文网)

Oitr

感谢老师的回复，我是做小鼠Th2分化的，但是试了很多次都没办法分化成功，流式检测是没有问题的。

niwanmao

Oitr 发表于 2022-3-22 21:56
感谢老师的回复，我是做小鼠Th2分化的，但是试了很多次都没办法分化成功，流式检测是没有问题的。
...

上面那个帖子指的就是诱导条件和样本前处理的优化，仔细看看，必有收获。

Oitr

请问老师们，我做Th2刺激分化，做了FMO ，看着好像Th2分化成功了，但是为什么不分群呢？

niwanmao

Oitr 发表于 2022-11-26 18:39
请问老师们，我做Th2刺激分化，做了FMO ，看着好像Th2分化成功了，但是为什么不分群呢？ ...

请查找以下原因：
1、FMO是否用的是同一份样本？
2、如果是，FMO样本是否同样经过固定、破膜？

Oitr

niwanmao 发表于 2022-11-27 15:10
请查找以下原因：
1、FMO是否用的是同一份样本？
2、如果是，FMO样本是否同样经过固定、破膜？

FMO 是用的同一个样本，并且都经过了固定和破膜

niwanmao

Oitr 发表于 2022-11-27 23:29
FMO 是用的同一个样本，并且都经过了固定和破膜

那么接下来就探讨破膜效果的问题了。
1、用一个胞内可以做出高表达的标记确认破膜剂效果。
2、确认无误，再确认胞内因子抗体的效果。

Oitr

niwanmao 发表于 2022-11-28 18:17
那么接下来就探讨破膜效果的问题了。
1、用一个胞内可以做出高表达的标记确认破膜剂效果。
2、确认无误， ...

1.首先我们这批数据也同时染了Ki-67，这个是一个核转录因子，因此我们是破膜后染色的，但是流式检测结果看这个分子效果还是很好的，这应该可以排除破膜剂的原因。
2.那老师， 像比如胞内因子抗体过期1个月之类的会对结果有很大的影响吗

niwanmao

Oitr 发表于 2022-11-29 23:18
1.首先我们这批数据也同时染了Ki-67，这个是一个核转录因子，因此我们是破膜后染色的，但是流式检测结果 ...

抗体过期是否会影响，还是需要看效果说话。如果你们能够确保刺激没问题，破膜没问题，那么只能怀疑到胞内因子抗体了。