胞内细胞因子检测

如果有人呼唤

各位老师好！最佳打算做人PBMC样本的胞内细胞因子检测，测CD4+T细胞和CD8+T细胞中IFN-gamma，TNF-alpha和IL-2的水平，有几个问题想请教一下:
1.因为是冻存的PBMC，请问是不是需要先培养过夜或者24小时之后再刺激？
2.培养一段时间单核细胞应该会贴壁吧，我需要用胰酶消化并收集贴壁细胞嘛？我在想我目的是看CD4+T细胞和CD8+T细胞内细胞因子的情况，是否直接收集悬浮细胞即可？
先谢谢各位老师们了～

niwanmao

1、建议培养过夜再刺激吧。至于要让细胞基本恢复了最好。
2、因为要测淋巴细胞的细胞因子分泌，所以只取悬浮细胞即可。

如果有人呼唤

niwanmao 发表于 2022-3-26 14:34
1、建议培养过夜再刺激吧。至于要让细胞基本恢复了最好。
2、因为要测淋巴细胞的细胞因子分泌，所以只取悬 ...

谢谢老师的解答~还有一个问题想请教一下，请问我如果用BD公司商品化的cocktail(佛波酯+PMA+离子霉素+Brefeldin A)，它的刺激效果主要跟它在培养基中的终浓度有关，还是跟种的细胞数量也有关呢？我是否需要保持实验组和对照组的细胞数量一致？谢谢老师~

niwanmao

如果有人呼唤 发表于 2022-3-26 21:39
谢谢老师的解答~还有一个问题想请教一下，请问我如果用BD公司商品化的cocktail(佛波酯+PMA+离子霉素+Bref ...

终浓度是最主要的，细胞密度虽然不是很重要，但如果有条件尽量控制一致。