上单染 FMO样本时，细胞数量需要和正式样本一致么？

jadedongdong

课题需要做3色分选，样本细胞数为10^6-7，因样本数少，上单染与FMO样本时，可否将其中一个样本的细胞数平均分，分别作为各单染FMO的上样样本，比如平均分为8份，一份为10^5-6细胞数，各自染上与正式样本同样浓度的单染或FMO抗体，来进行调电压和补偿？

niwanmao

jadedongdong 发表于 2022-3-27 14:41
刚查了下，PE 和FITC的光谱有重叠，那么是否只做这两个抗体的单染管，其他单染管和FMO就不用做了是么？
...

前面说过了，如果指标是有很好的阴、阳性分群，FMO不是必做的。明白了吗？

scaleus

不用啊 对照管你给个5次方 能收到一定量的细胞就行

jadedongdong

scaleus 发表于 2022-3-26 17:26
不用啊 对照管你给个5次方 能收到一定量的细胞就行

就是说，单染和FMO样本和正式上样样本数量可以不同是么？同一类型的样本就行是么？

niwanmao

是哪3色？一般如果荧光素没有光谱重叠，并且标记的分群清楚，单染和FMO是不一定要做的。

单染和FMO的样本要和实验样本一样，否则就无法反映出相同的本底荧光和特性。

细胞数方面，@scaleus  站友已说明了。

jadedongdong

niwanmao 发表于 2022-3-27 09:41
是哪3色？一般如果荧光素没有光谱重叠，并且标记的分群清楚，单染和FMO是不一定要做的。

单染和FMO的样本 ...

倪老师，是APC PE FITC和DAPI  ，需要做单染和FMO么？
因为我需要将样本的一类细胞全部分选出来，做下游实验，上样细胞量可以是10^6-7，也即样本原液么？

jadedongdong

jadedongdong 发表于 2022-3-27 14:26
倪老师，是APC PE FITC和DAPI  ，需要做单染和FMO么？
因为我需要将样本的一类细胞全部分选出来，做下游 ...

刚查了下，PE 和FITC的光谱有重叠，那么是否只做这两个抗体的单染管，其他单染管和FMO就不用做了是么？
另外，上机调试时，是否需要上unstain的样本，unstain+DAPI，全染+DAPI的样本，如果需要的话，是否也要求与正式上样的样本细胞数量一致呢？

jadedongdong

niwanmao 发表于 2022-3-28 07:54
前面说过了，如果指标是有很好的阴、阳性分群，FMO不是必做的。明白了吗？
...

懂了，谢谢老师