关于NK细胞NKG2D的标记问题

615825824

我的实验不需要破膜 标记出来的NKG2D结果多在百分之80以上（全血直接标记而后裂红上机），而师姐的实验需要破膜后标记细胞因子（但她的NKG2D是破膜前标记的），最后她的G2D表达多在百分之50上下，一个破膜会造成如此大的差别吗？ NKG2D这个标志正常情况下表达大概是多少呢？麻烦老师解答

niwanmao

图传上来看看，阳性群有没有分开？是人NK还是小鼠的？

615825824

图现在在科室里的机器里，，我先描述一下吧。
人NK，阳性群并没有分开，是用中性粒或者B细胞一类不表达NKG2D的细胞作对照来分的，基本就是一群细胞中间一刀切。 有没有可能是破膜使得这些对照细胞的形态改变 使得阴阳的界限不准确了？

niwanmao

615825824 发表于 2022-4-10 12:19
图现在在科室里的机器里，，我先描述一下吧。
人NK，阳性群并没有分开，是用中性粒或者B细胞一类不表达NKG2 ...

这样就有问题了，内参是可以，但是需要谨慎选择细胞，如果内参细胞的非特异性结合与靶细胞不一致，就不能用。
尤其阴性和阳性分不开的话，这个表达率的结果就存疑了。建议用FMO对照吧。

615825824

谢谢老师答疑 那至少我不破膜时得出的结果还算是可靠一点是吗？ 我也看了一些别的文献，其中不破膜标记NKG2D 大部分都是80 90%以上。所以我觉得师姐他们的过低的结果可能会有一些问题。后续我会去做几次FMO对照去验证一下。

niwanmao

615825824 发表于 2022-4-11 14:26
谢谢老师答疑 那至少我不破膜时得出的结果还算是可靠一点是吗？ 我也看了一些别的文献，其中不破膜标记NKG2 ...

主要是设门参照的问题，如果有FMO对照，并且事先Fc阻断过，那么结果就可靠。