小鼠肺组织和外周血MDSC检测的几个问题

地势坤

老师们好，最近我想做小鼠肺、脾、外周血的MDSCs流式，有几个问题搞不明白了，想请教大家。
1.外周血处理，需要加淋巴细胞分离液离心分离后，取PBMC吗？是否可以不离心，直接裂红液后加抗体孵育上机？两者哪个更好一些？
2.之前肺组织做过一次预实验，没有加CD45。查了查资料，发现脾和外周血可以不用加CD45标记，如果是肺则需要加CD45，是这样吗？但是看文献测肺组织的MDSC，有的加了CD45，有的没加，现在不知道怎么办好了。
3.CD11b ly6g ly6c （cd45）这样标记应该是正确的吧？能否把ly6g+和ly6c+两组亚群相加，得出来总得MDSC数量？

niwanmao

1、建议分离单个核细胞，这样结合了密度，会更准确确认PMN-MDSC，详见：如何将中性粒细胞和PMN-MDSCs分开？
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-9549-1-1.html
(出处: 流式中文网)

2、加CD45会好一些，可以避免一些实体组织细胞的干扰。
3、CD11b+Ly6G+Ly6Clow，如有条件加上CD115 和 CD244（同样参考第1点的帖子）。

以上仅作为不成熟的理论参考，欢迎其它做小鼠MDSC的FLOWER补充。

半年y

说一下我的见解：肺脏单细胞悬液如果做的好的话，其实白细胞率已经非常高了，并且淋巴和粒细胞分的非常清楚。但是如果做的效果不好，在经费允许和有多余通道得时候，还是需要加入CD45的，毕竟肺脏不是免疫器官。  其次就是关于你想检测总MDSC，实际上只需要加入Gr-1这个抗体就好，Gr-1包括了6C和6G

hnsyryx

半年y 发表于 2022-5-13 18:26
说一下我的见解：肺脏单细胞悬液如果做的好的话，其实白细胞率已经非常高了，并且淋巴和粒细胞分的非常清楚 ...

请问，肺单细胞悬液制备，您用的方法是啥，我最近做了一次，肺灌流离体切碎后，用胶原酶I (终浓度1mg/ml) 37℃ 200rpm 消化1h，结果显微镜下计数时发现，细胞成团，感觉是死了。不知道是不是有些条件需要调整

半雀

半年y 发表于 2022-5-13 18:26
说一下我的见解：肺脏单细胞悬液如果做的好的话，其实白细胞率已经非常高了，并且淋巴和粒细胞分的非常清楚 ...

请教一下，骨髓、外周血、脾这些是不是都不用CD45了？为什么呢

niwanmao

半雀 发表于 2024-2-1 18:48
请教一下，骨髓、外周血、脾这些是不是都不用CD45了？为什么呢

还是加的多一些

范晋波

半雀 发表于 2024-2-1 18:48
请教一下，骨髓、外周血、脾这些是不是都不用CD45了？为什么呢

加上吧，别考虑别加了，加上可以排除很多干扰，没必要剩这一个抗体

半雀

范晋波 发表于 2024-2-2 09:54
加上吧，别考虑别加了，加上可以排除很多干扰，没必要剩这一个抗体

好的谢谢 确实是

半雀

niwanmao 发表于 2024-2-2 08:56
还是加的多一些

嗯嗯好的谢谢老师

AAAAAjjj

hnsyryx 发表于 2022-6-22 10:01
请问，肺单细胞悬液制备，您用的方法是啥，我最近做了一次，肺灌流离体切碎后，用胶原酶I (终浓度1mg/ml) ...

可以考虑加一下死活染料排除死细胞，肺组织加死活染料还是很有必要的，消化时间太久了，加了染料结果会好很多