请教iTreg细胞圈门

wangyouguang

我在体外诱导iTreg（诱导方法参考Tao Xu et al., nature, 2017）过程中碰到一点关于圈门的问题：就是第二步和第三步去粘连之后，iTreg出现了俩群，不知道这是正常现象还是诱导出问题了？

niwanmao

FSC-A/FSC-H这里呈现两群，是否对比过这两群有无差异？你们用的是什么仪器？

wangyouguang

niwanmao 发表于 2022-4-24 19:23
FSC-A/FSC-H这里呈现两群，是否对比过这两群有无差异？你们用的是什么仪器？ ...

这俩群都能表达foxp3，用的cytoflex

wangyouguang

niwanmao 发表于 2022-4-24 19:23
FSC-A/FSC-H这里呈现两群，是否对比过这两群有无差异？你们用的是什么仪器？ ...

这和仪器有关么

niwanmao

wangyouguang 发表于 2022-4-25 13:39
这和仪器有关么

这台仪器的排除粘连体效果不是很理想，所以我觉得你不需要太过关注这里的粘连体门了。

wangyouguang

niwanmao 发表于 2022-4-25 15:11
这台仪器的排除粘连体效果不是很理想，所以我觉得你不需要太过关注这里的粘连体门了。 ...

我的细胞密度不高，0.2M个细胞用150ul PBS重悬的，而且我在光镜下看了一下，绝大部分都是单细胞状态的，应该不存在粘连？

niwanmao

wangyouguang 发表于 2022-4-26 12:27
我的细胞密度不高，0.2M个细胞用150ul PBS重悬的，而且我在光镜下看了一下，绝大部分都是单细胞状态的， ...

镜下观察单细胞，说明样本处理质量过关，但是上机获取时，如果速度过高，或液流不稳定，容易形成粘连体。