提取单个核上流式分群不清

ganlimi · 发表于 2011-7-11 11:03:14

请教各位大侠。我提取单个核细胞上流式后分群不明显，老师说没有明显单核细胞群，且碎片较多。我想问下是跟我分离细胞技术不好有关系吗？跟淋巴细胞分离液没有避光保存有无关系，而且我最近用sigma1083的淋巴细胞分离液分离人血，白膜层分的还是可以的，但有时候可以看到细胞成团，成脂肪滴状。建议怎样才能更好分群。另外如果碎片多，或者分群不明显，可以导致同型对照表达比标本还高的现象吗？谢谢！
未命名.jpg

niwanmao · 发表于 2011-7-11 12:32:51

ganlimi 发表于 2011-7-11 11:03

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请教各位大侠。我提取单个核细胞上流式后分群不明显，老师说没有明显单核细胞群，且碎片较多 ...

单个核细胞的提取，本站专门有个精华帖在讨论，请参阅：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... &extra=page%3D1

对于这个图形，我觉得分群还可以啊，虽然碎片是多了点，但是淋巴细胞成群还是可以的。

同型对照的荧光强度比标记高的现象跟细胞状态没有关系，而是跟同型对照的非特异性结合能力有关。

一成天 · 发表于 2011-7-11 20:15:18

本帖最后由一成天于 2011-7-11 20:16 编辑

应该还可以，碎片确实多了点

chujindong · 发表于 2011-7-11 23:48:47

我用的是1077啊，1083也可以吗？

chujindong · 发表于 2011-7-14 21:14:34

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我查了，1083不是做大鼠、小鼠的吗？怎么拿来做人血呢？可能还是不适合做人血吧？

ganlimi · 发表于 2011-7-18 22:17:32

1.实验室老师说，我的细胞群很怪，没有看到明显的单核细胞群，就是只看到淋巴细胞群的意思。
2.因为没赶得及买sigma1077，用着别人的sigma1083，感觉白膜层比较稳定，每次都能清晰的出来。后来买了个同样是sigma 1077的，老是分不出白膜层（不过如果运气好能分出白膜层的话，感觉细胞洗出来会比较干净），导致还没有用这个新买的1077分的细胞上机。

ganlimi · 发表于 2011-7-18 22:24:13

谁有用ficoll液分离了PBMC后流式上FSC-SSC的图啊？

ganlimi · 发表于 2011-7-18 22:41:23

本帖最后由 ganlimi 于 2011-7-19 15:06 编辑

natrue FSC.jpg

这个是natrue上面的图。SSC与FSC横纵坐标的位置与我的图不同。

chujindong · 发表于 2011-7-19 00:27:31

本帖最后由 chujindong 于 2011-7-19 00:28 编辑

回复 ganlimi 的帖子

这是我第一次上机做的，凑合着看看吧
未命名.JPG

ganlimi · 发表于 2011-7-19 15:07:57

本帖最后由 ganlimi 于 2011-7-19 15:08 编辑

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你的R2是单核细胞吗？

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