电压补偿调节

Fairy

wxd 发表于 2022-6-9 11:15
凋亡的十字门正常情况下是这样的， 先根据Annexin V-FITC上的细胞分团，画十字门，重点确认那条竖线的位置 ...

非常感谢老师，学习到啦，我之后看看有PerCP通道的话试试。
有问题还想请教老师
第一个是各个实验组取的分成了Blank，这个是前面确定门的空白管吗？如果是我记得这个空白管不应该是一组阴性对照吗？如果不是那这管的作用是？
第二个是FITC和PI通道补偿的调节一般就是横平竖直，电压的调节，因为是第一次做不太会，看了B站有老师说将FSC和SSC的电压调整到10的三次左右就可以，但具体没讲原因，我就也一直是这样做的，请问老师这样调可以吗？麻烦老师啦

Fairy

范晋波 发表于 2022-6-9 11:18
Annexin v  背景干扰比较强，不需要Blank，blank主要用来调整FSC和SSC和大致的FITC PE  Percp电压即可，而 ...

好的，谢谢老师。Annexin V的背景干扰是指我做的这个吗？是怎么看的呀，要怎么调整？阈值做的时候是有切掉的

wxd

是的，这个Blank就是确定门的空白管。这一管的作用是初步调节一下FSC SSC以及FITC和PI通道的电压，以及大致观察一下样品总体的细胞大小分布以及荧光分布，最重要的作用就是确定Annexin V以及PI这两个荧光染料是不是正常的，如果其他管的荧光向比于Blank没有偏移，基本可以确定是荧光染料有问题了。图1是我做的一个凋亡实验，处理组是含有不同浓度DOX的，分成了三群。

Fairy

wxd 发表于 2022-6-10 09:38
是的，这个Blank就是确定门的空白管。这一管的作用是初步调节一下FSC SSC以及FITC和PI通道的电压，以及大致 ...

好的谢谢老师，我明白了，请问老师电压的调节我这样进行行吗？如图空白组自动调节FSC和SSC电压找到细胞位置，通过直方图调节FITC与PI的电压使其大致处于10的三次方左右可以吗？还是根据其他调节？麻烦老师了谢谢

niwanmao

Fairy 发表于 2022-6-10 14:38
好的谢谢老师，我明白了，请问老师电压的调节我这样进行行吗？如图空白组自动调节FSC和SSC电压找到细胞位 ...

对于Annexin V/PI双染，分群明显，可直接用双染的细胞调节补偿，使得阴性群都能出来，并且双阳性细胞没有跑到坐标轴外即可。

Fairy

niwanmao 发表于 2022-6-12 09:23
对于Annexin V/PI双染，分群明显，可直接用双染的细胞调节补偿，使得阴性群都能出来，并且双阳性细胞没有 ...

好的，多谢老师指导