活细胞会分两群吗？

cnynjn2007 · 发表于 2022-6-16 14:31:34

最近做人的外周PBMC样本，进行抗原特异性B细胞色，流式检测发现活细胞被分成两群，如下图所示，这是什么原因导致的呢？PBMC复苏后一直放在冰上染色，上机时的细胞也进行了台胖蓝染色，也显示细胞活率是90%以上，所以流式上死活染料染的活细胞结果不太可能只是最左边这群。但不知为什么会出现这样的结果，请论坛里各位老师指教，多谢！

niwanmao · 发表于 2022-6-16 14:53:07

这可以的，Live/dead并不总是像CD3抗体那样肯定阳阴分开很清楚，在有些细胞上或者某些时候可能会分得不太开或者形成强度不同的群体。

你再通过CD3+T细胞的分布确认一下，箭头所指这个门里面的两块都有，就放心这么圈。

cnynjn2007 · 发表于 2022-6-16 15:24:40

niwanmao 发表于 2022-6-16 14:53
这可以的，Live/dead并不总是像CD3抗体那样肯定阳阴分开很清楚，在有些细胞上或者某些时候可能会分得不太开 ...

多谢倪老师解答，CD3反圈门后确实在两群细胞都有分布

niwanmao · 发表于 2022-6-16 17:58:06

cnynjn2007 发表于 2022-6-16 15:24
多谢倪老师解答，CD3反圈门后确实在两群细胞都有分布

那可以的。

Climber · 发表于 2022-6-21 21:57:07

感觉根据P3P4的形态可以推断，你的A750“中表达”的那群细胞实际上就是A700的阳性群，实际上就是你的补偿没调好，CD3的A700漏给A750的，可以验证下

cnynjn2007 · 发表于 2022-6-22 16:36:40

Climber 发表于 2022-6-21 21:57
感觉根据P3P4的形态可以推断，你的A750“中表达”的那群细胞实际上就是A700的阳性群，实际上就是你的补偿没 ...

多谢您的建议，我检查了补偿，应该是没有问题的，如下图所示是当前补偿下的CD3-AF700和Live-A750的双轴图。图在下面

cnynjn2007 · 发表于 2022-6-22 16:37:36

上一个回复不知道怎么增加图片，回复在这里

Climber · 发表于 2022-6-24 14:57:04

cnynjn2007 发表于 2022-6-22 16:37
上一个回复不知道怎么增加图片，回复在这里

那确实就是分两群了

shiyisyl · 发表于 2022-6-26 12:51:42

我也碰到了这个问题，刺激培养后染色，live-dead分3群，中阳的可能是培养过程中凋亡的细胞？

cnynjn2007 · 发表于 2022-7-4 19:44:44

shiyisyl 发表于 2022-6-26 12:51
我也碰到了这个问题，刺激培养后染色，live-dead分3群，中阳的可能是培养过程中凋亡的细胞？ ...

恩恩，那可能就是像倪老师说的那样处于不同状态的细胞群了

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[标本处理] 活细胞会分两群吗？