Th1/17检测中PMA刺激，IL-17A检测不到

无知的牧羊人

在检测Th1/17中，使用PIB对PBMC细胞（单采血采集后分离的PBMC）进行刺激。
已经对PIB中的浓度以及PIB刺激时间进行过测试。
各种方法尝试后，IL-17A均无表达。
请问有没有老师遇到过这样的情况，是由于什么问题导致的呢？对于PBMC刺激，检测Th17有什么好的解决方式么？

niwanmao

如果确定刺激条件没有问题，那么可能性最大的就在于染色上面，可能是抗体，也可能是破膜剂。

无知的牧羊人

niwanmao 发表于 2022-6-25 19:55
如果确定刺激条件没有问题，那么可能性最大的就在于染色上面，可能是抗体，也可能是破膜剂。 ...

倪老师，实验中Th1和Th17是在一个panel中一起规定破膜的，Th1是检测到的，那说明破膜条件应该是ok的。抗体的话，是抗体量的问题么？但是抗体我已经是厂家推荐的最高量了。
想问一下 样本本身PBMC经过冻存后会不会对Th17的表达有很大的影响

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2022-6-26 09:34
倪老师，实验中Th1和Th17是在一个panel中一起规定破膜的，Th1是检测到的，那说明破膜条件应该是ok的。抗 ...

抗体量并非越多越好，而是有一个范围。
Th1你所能测的到，不知道表达率、分群是否正常？尽量能放图上来讨论吧。

无知的牧羊人

请见附图

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2022-6-28 16:46
请见附图

VioGreen和VioBlue补偿如何？是否在排除VioGreen的时候，把VioBlue阳性的信号排除掉了？