浆细胞分化发育各阶段表型可以鉴别吗？

niwanmao

『浆细胞分化发育各阶段表型可以鉴别吗？』这个问题是2017年流式中文网热心站友FCMao提的（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5736-1-1.html），当时我在回复中只能提供一幅B细胞分化的详图，里面提到浆母和成熟浆之间的一些差异，人类浆母细胞CD19＋、CD38high、CD27high、CD269＋、MHCII＋、CD20－、CD138－，而成熟浆细胞则CD19low、CD20－、MHCII－、CD38high、CD138＋、CD269＋、CD27＋、CXCR4＋：


表格和实际的散点图还是不同的，落实到真实的分析中，如何去分析呢？还是有点难度的。

后来，还是FCMao站友特别认真，找到了一篇2009年Blood杂志上的好文章，将该问题圆满解决，这是流式中文网论坛功能的典型案例。

在此特地插一句，流式中文网论坛开设的目的除了分享技术以外，问答并不是单纯的你问我答，而是在你与我的互相讨论中，不断有众多站友参与，形成一个互动氛围，产生头脑风暴，最后将问题圆满解决，如同吃了一顿满汉全席，每人都各有收获，意犹未尽。

现在转回正题，我们将这篇Blood文章中的图片提出来，与大家分享，以后大家在浆细胞阶段的判断上、淋巴瘤的诊断上就会心里有数。

这篇文章的作者将人PBMC中的记忆B细胞提取出来之后，以细胞因子混合物培养，并以ODN等刺激，促使其在体外转化为浆细胞，从而得以对B细胞到浆细胞分化的各个阶段进行监测。

浆细胞体外生成的三个阶段
作者主要测了4个时间点，第0天、第4天、第7天、第10天。
第0天，B细胞主要是记忆B表型CD27＋CD19＋，S期只有0.5％±0.3％，小淋巴细胞形态；
第4天，部分变为活化B，细胞体积增大，CD20减弱，CD38逐渐增高，S期比例开始增高到38％±3％，另一部分已从活化B转变为浆母细胞，体积略缩小，但胞浆颜色变深，核浓缩，CD38进一步增高，CD20转阴，S期比例增高至50％±5％；
第7天，活化B细胞非常少了，大部分转变为浆母细胞，但浆母继续分化，增殖能力降低，细胞体积再次增大，这应该就是形态上常常提到的幼浆吧。此时S期比例降低，约13％±4％；
第10天，浆母细胞全部转变为成熟浆细胞，CD20－CD38＋＋，不大分裂了，S期比例只有2％±0.1％。

结合下图和上面的文字，一起体会一下吧：


4个时间点的免疫球蛋白变化如何
作者还对这4个时间点的免疫球蛋白sIgM、sIgA、sIgG、cyIgM、cyIgA、cyIgG进行了测定。在第0天的记忆B细胞，免疫球蛋白均呈不温不火的表达，大多在25～43％之间；到了第4天活化B细胞降低，sIgM、cyIgM表达升高，sIgG水平降低；第7天浆母细胞阶段时，sIgM和cyIgM显著降低，sIgG降到最低点，但cyIgG升高到56％左右；到了最后的成熟浆细胞阶段，IgM和IgA均很低，sIgG也非常低，而cyIgG占绝对优势。


由此我们可以看出，从B到浆的分化过程， 就是IgM向IgG切换的过程。培养基中分泌的IgG、IgM、IgA测定，也证实了这一点。


核内转录因子的变化
细胞核内转录因子PAX5、BCL6、IRF4、PRDM1、XBP1在浆细胞分化过程中也发生明显的变化。PAX5是B细胞特异性标记，所以在分化过程中发生显著降低甚至缺失；BCL6也发生较明显的降低；IRF4在活化B阶段显著增高后，浆母和成熟浆变化不太大；PRDM1和XBP1在活化B和浆母细胞阶段略增高，到了成熟浆细胞阶段进一步增高达到高峰。


表型和归巢受体的表达变化
记忆B→活化B→浆母细胞→成熟浆细胞，4个阶段的CD19、CD27、CD45、MHC II、Ki67、CD43、CXCR5、CXCR4、CCR10、CD62L，均发生不同的变化。

CD19、CD45、MHCII荧光强度逐渐降低，但仍阳性；Ki67在活化B和浆母细胞表达达到高峰，到了成熟浆细胞又归于静寂，这与增殖一致；CD27、CD43、CD62L逐渐增高；CCR10从阴性逐渐转为阳性；CXCR5、CXCR4降低明显，呈阴性或弱阳性。


看到这里，浆母细胞与成熟浆细胞、浆母与B细胞之间的区别，你了解了吗？记不住，赶紧收藏起来备忘吧！

信源：Jourdan M, Caraux A, De Vos J, et al. An in vitro model of differentiation of memory B cells into plasmablasts and plasma cells including detailed phenotypic and molecular characterization. Blood. 2009 Dec 10;114(25):5173-81. doi: 10.1182/blood-2009-07-235960.（全文免费：http://www.bloodjournal.org/cont ... 14/25/5173.full.pdf）

神内小白

老师你好，为什么记忆B细胞活化后IgG会表达下降

niwanmao

神内小白 发表于 2020-4-19 02:57
老师你好，为什么记忆B细胞活化后IgG会表达下降

没有显著差异的

飞翔

MBCs、actBCs、PBs、PCs分别对应的是记忆B细胞、活化B细胞、浆母细胞、成熟浆细胞，这个想分离产生特异性IgG抗体的细胞，用什么marker为好，CD138吗

niwanmao

飞翔 发表于 2023-3-18 16:12
MBCs、actBCs、PBs、PCs分别对应的是记忆B细胞、活化B细胞、浆母细胞、成熟浆细胞，这个想分离产生特异性Ig ...

参见
抗体分泌细胞（ASC）是什么？如何分析？
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-10360-1-1.html
(出处: 流式中文网)