流式分选原理

Veblen

流式分选原理：一般地，在流动室的喷嘴（Nozzle）上方配有一个高频压电芯片，形成高频振荡，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中；将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴经过高压电场时，发生偏转，落入各自的收集容器中，而没有充电的液滴落入中间的废液接收器，从而实现不同类型的细胞的分离。
我的问题是：1. 将液滴充以正、负不同的电荷，怎样知道哪些液滴充正电，哪些充负电？
                     2. 举例：需要将GFP+细胞充正电，但全部细胞需要先经过流动室，被激光激发后，通过软件分析才知道哪些是GFP+细胞，这时细胞已经经过流动室到废液管路了，这时再充电去分选吗？
                     3. 对液滴充电，我认为液滴里应该既有阳性和阴性的细胞，当液滴经过高压电场时，发生偏转，落入各自的收集容器中，那收集到的细胞也是一群杂细胞啊。
                    谁能具体，简单易懂分享一下分选的原理哈，上面文字原理大概能看懂，但去分析逻辑就不通了，请指点哈。

niwanmao

1、利用偏转方向就能判断是正电荷还是负电荷，往负极偏转的就是带正电荷，反之负电荷。
2、速度不是你能想象的，激发点到偏转处的这个延迟，软件和机器已经计算在内了，你可真是瞎操心啊。
3、每个液滴，理论上都是只包含一个细胞，在实际上，当然偶尔会包含两个，但概率较低，所以纯度是评估液滴形成和分选质量的一个指标。

hezeljgouc

1. 带电液滴要在电场中偏转，根据你的设置，向右偏转的细胞加正电荷，向左偏转的细胞加负电荷
2. 分选流式细胞仪中细胞经过激光检测点后，经喷嘴喷出，在空气中断裂形成液滴（尚未进入废液管路）；在细胞所在液滴到达液流最下端（断裂前的瞬间），给液流通电，然后断裂形成单独液滴即携带电荷，同时中和连续液流中的电荷，这样就能保证只给目的液滴加电荷。因为检测细胞参数和液流断裂产生液滴不是同时发生的，要想只给含有目的细胞的液滴加点，给液流通电的时间就很关键，从激光检测点到液流断点的时间，即液滴延迟drop delay的设置就非常重要。不同的仪器各有不同的方法设置drop delay，只要液流状态发生改变，就需要重新校正drop delay.
3. 选择好一定大小的喷嘴后，鞘液压力和震荡频率一般就固定了，也就是说每秒产生的液滴数量是固定的，为保证分选纯度，一般上样速度flow rate（events/s）要小于液滴数量的1/4-1/3，这样尽量让每个液滴中只有一个细胞。当然根据泊松分布，肯定有一些液滴中有两个或多个细胞，如果进行纯度模式分选的话，就会舍弃这种液滴，也就是说虽然检测到了目的细胞，但是因为有其他细胞污染没分选该液滴，这就是分选效率的由来。

Veblen

hezeljgouc 发表于 2020-11-9 11:31
1. 带电液滴要在电场中偏转，根据你的设置，向右偏转的细胞加正电荷，向左偏转的细胞加负电荷
2. 分选流式 ...

谢谢您的解答，明白了哈

Veblen

hezeljgouc 发表于 2020-11-9 11:31
1. 带电液滴要在电场中偏转，根据你的设置，向右偏转的细胞加正电荷，向左偏转的细胞加负电荷
2. 分选流式 ...

您好，我还有个地方不太明白，文中提到“形成单独液滴即携带电荷，同时中和连续液流中的电荷，这样就能保证只给目的液滴加电荷”。
为什么之前连续液流中需要携带电荷？在断裂成液体时对需要的液滴加上相应的正/负电荷不就好了吗？没加电荷的液体就直接不偏转也就不要就行了吧。

hezeljgouc

Veblen 发表于 2020-11-17 11:55
您好，我还有个地方不太明白，文中提到“形成单独液滴即携带电荷，同时中和连续液流中的电荷，这样就能保 ...

因为从连续液流断裂脱离形成的液滴在空气中不和任何东西接触，没办法加电荷。只能在目标液滴（预测这时候还没脱离液流）处于液流最末端时，给整个液流通电（电线一般在流动室上方），这样目标液滴脱离后就携带电荷了，但是此时液流中还有电荷需要中和掉，才能保证后续产生的其他非目标液滴不带电荷

Veblen

hezeljgouc 发表于 2020-11-17 13:17
因为从连续液流断裂脱离形成的液滴在空气中不和任何东西接触，没办法加电荷。只能在目标液滴（预测这时候 ...

感谢，这样的解释很容易明白。
Thanks a million