各位大神，DC细胞成熟度问题求助！

Arles331

由于之前做了C57小鼠肿瘤样本流式检测，当时的设计由师姐进行。现在发现师姐的设计有问题，想请教各位大神老师和战友，是否CD45+CD11C+MHC II+可代表成熟DC细胞。

追加提问，可以请各位老师帮忙看一下我的CD11c+圈门是否正确吗？

niwanmao

MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞因子IL-1β和IL-6，如果该因子也高，就可以充分证实成熟了。

Arles331

niwanmao 发表于 2022-1-9 19:28
MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞 ...

谢谢倪老师，还想请教您一下CD80+CD86+和上述CD11c+MHC II+两种方法间是否存在优劣关系？

wxd

CD11c是小鼠DC的标志性Marker，不代表DC是否成熟，如果是骨髓诱导DC的话，通常用表达CD11c细胞的比例表示DC的纯度。CD80+CD86也可用于表示DC的成熟，但是如果不与CD11c一起染色的话，只适用于纯的DC细胞系，用于由多种免疫细胞存在的肿瘤模型是不行的。因此楼主师姐设计的CD11c+MHC II+检测DC是更合适一些的。

Arles331

谢谢您，辛苦您了！受益良多，感谢对流式小白的帮助~

Arles331

wxd 发表于 2022-1-10 11:33
CD11c是小鼠DC的标志性Marker，不代表DC是否成熟，如果是骨髓诱导DC的话，通常用表达CD11c细胞的比例表示DC ...

感恩您！您辛苦了！感谢您的讲解和对流式小白的帮助~

Arles331

wxd 发表于 2022-1-10 11:33
CD11c是小鼠DC的标志性Marker，不代表DC是否成熟，如果是骨髓诱导DC的话，通常用表达CD11c细胞的比例表示DC ...

不好意思老师，还是想请教您一下我在圈门时是先圈CD45+再在其中圈出CD11c+MHC-II+还是先圈出CD45+CD11c+再选择其中的MHC-II+？

Arles331

niwanmao 发表于 2022-1-9 19:28
MHCII一定要高表达才行。不过即使是MHC II高表达，也有可能存在“semi-mature“的DC，所以建议同时检测细胞 ...

不好意思倪老师，学生还是想请教您一下我在圈门时是先圈CD45+再在其中圈出CD11c+MHC-II+还是先圈出CD45+CD11c+再选择其中的MHC-II+？

niwanmao

Arles331 发表于 2022-1-10 20:44
不好意思倪老师，学生还是想请教您一下我在圈门时是先圈CD45+再在其中圈出CD11c+MHC-II+还是先圈出CD45+C ...

设门顺序不影响最终结果，但是可能会对准确度会有点影响，要结合你所用的荧光素分子决定如何设门顺序。

多数情况下，两者均可。

Arles331

niwanmao 发表于 2022-1-11 07:34
设门顺序不影响最终结果，但是可能会对准确度会有点影响，要结合你所用的荧光素分子决定如何设门顺序。
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谢谢倪老师！您辛苦了~~