艾森流式细胞仪阈值改变导致CBA标曲拟合不出来

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使用艾森流式细胞仪，电压不变，用阈值10000，上样CBA 标品，得到数值导出FCS，用FCAP分析和flowjo分析出MFI，在拟合都能得到很好的曲线。但是用阈值100000，上同一标品得到数值导出FCS，用FCAP分析和flowjo分析出MFI，在拟合不出标曲，即MFI不随浓度增高而升高。
但两种情况在艾森流式细胞仪上显示正常，MFI随浓度升高而升高，用期显示的MFI去拟合可得到很好的标曲
这是为什么呢？

在流式细胞仪beads 位置相同。

niwanmao

信号都没问题。
问题应该出在你上样的时候，不同浓度上反了。

阈值10000的，趋势不错，但最后625和1250这两管，肯定反掉了，因为625的反而荧光强度大于1250。只是因为其它点都是好的，所以不影响你最后的拟合。

而阈值100000，至少两个地方反了，第一个是10和20，第二个也是625和1250。多个点错乱，曲线肯定拟合不好。

haoxu

阈值设置100000拟合不起来的原因是因为你导出的数据与FCAP软件的兼容性差导致的。
你将安捷伦的数据导出时高级设置-参数设置由“自动”修改为“根据图”，然后导出FCS格式的数据就可以拟合了。
导出前确保所有样品荧光通道的坐标轴一致，并且最高浓度和最低浓度都在坐标轴范围内。