受体占有率实验中的补偿调节

毛婷婷

在受体占有率实验中，请教一个关于补偿的问题，在这组实验中，不同处理组的PE通道的MFI应该是不一样的，那这种情况下如果是固定PE的电压收样，每个组的补偿值也应该不同吧？文献中的组别有： CRO：基线空白； LRO：血样与JS001孵育（终浓度：0.59 pmol / l）； HRO：血样与JS001孵育（终浓度：37.87 pmol / l）。
原讨论贴的地址如下：

https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8477-1-1.html

niwanmao

电压当然需要固定。电压固定后，补偿就是固定的。

毛婷婷

倪老师，可能文中的荧光素用的跟我们的有差别，我再仔细跟您说一下我们实验。我们的荧光素和通道信息在附图中：
1. 我们用的是带PE这个荧光素标记的抗体去标记肿瘤细胞，
2. 用带APC这个荧光素的二抗去标记待测抗体在体内的结合情况。也是要检测待测抗体的RO。那在这种情况下，给同行对照抗体和给不同浓度待测抗体在APC通道上的MFI就会有很大的不同。
3. 这样的话，固定PE和APC通道的电压收样，不同的组的补偿是应该一致还是不一致？
4. 这个问题困扰我很久了，最开始我觉得：PE通道的电压固定，PE标记的marker，不同的组差别很小，那么PE漏到APC的应该也就是固定的。那这样想的话，不同的给药组的补偿基本上就是一样的。
5. 可是后面收完样仔细去看每个组PE+APC的二象限点图，发现不同组用同一个补偿是调不平的。
很想知道答案，麻烦老师解答一下。非常感谢

niwanmao

毛婷婷 发表于 2023-1-6 08:54
倪老师，可能文中的荧光素用的跟我们的有差别，我再仔细跟您说一下我们实验。我们的荧光素和通道信息在附 ...

首先可以明确的是，电压固定，补偿肯定不会变。

至于你所描述的不同组之间，用了同一个补偿，有些补偿调不平，我不知道图形究竟是什么样的，这是否意味着两种可能性：
1、不同组的本底不同造成？
2、补偿本就未调到位，在偏弱一点的时候看不出未调平的状态，在荧光偏强的时候，就看到强荧光部分上翘。

毛婷婷

您说的第二点是不是跟图中要表达的意思一样？
第一点您提到的不同组的本底是指什么？未染色的时候？染了对照抗体的时候？还是有阳性群体里的阴性群的MFI不一样？
我们实验中PE所标记的肿瘤marker的表达，不同样本确实会有点不同。是由于这样导致的么？
很遗憾我不太方便分享数据，不然跟您讨论起来会更直观。