请问如何提高体外培养的小鼠脾脏细胞的活性？

liaomin

为研究某基因敲除后对T细胞功能的影响，需要取脾脏细胞进行直接染色（包括表面染色和胞内刺激阻断后染色），同时取脾脏细胞体外培养，用CD3,CD28刺激活化，通过CFSE染色检测增殖，通过诱导分化检测细胞分化情况，以及T细胞凋亡的检测。上一次提了9只小鼠的脾脏，CFSE染色后培养3天，流式上机检测发现，前面3只小鼠的细胞活性都比较差，但是后面三只小鼠的活性比较好，增殖峰很明显。再加上通过Annexin V & PI检测凋亡的时候发现，大多数细胞都能染色PI，感觉细胞状态不好。所以我就在想是不是小鼠脾脏细胞离体时间太长（单个细胞悬液是一只放在冰上的，但是从第一只小鼠取脾到最后全部细胞铺完板子间隔了5-6个小时），导致细胞活性比较差呢？请问大家取小鼠脾脏比较多的时候，有没有什么好的方法能够使脾脏细胞在体外保持更好的活性呢？谢谢老师和各位朋友的解答和指教！
图1 取的第一只小鼠脾脏细胞的CFSE染色



图2 较后面取的小鼠脾脏细胞CFSE染色

niwanmao

1、多找些人，流水线操作。
2、尽量全程保持在冰上。
3、尽量每批次少做几只，多做几批。

liaomin

niwanmao 发表于 2023-1-7 11:11
1、多找些人，流水线操作。
2、尽量全程保持在冰上。
3、尽量每批次少做几只，多做几批。

好的，谢谢老师！ 请问老师您觉得如果我用完全培养基重选后把细胞放在培养箱里面而不是放冰上可以吗？

niwanmao

liaomin 发表于 2023-1-8 10:31
好的，谢谢老师！ 请问老师您觉得如果我用完全培养基重选后把细胞放在培养箱里面而不是放冰上可以吗？ ...

可以的。

liaomin

niwanmao 发表于 2023-1-9 07:28
可以的。

好的，感谢老师您的耐心解答