PBMC破膜后CD56指标出现差异

DR-ing

    最近在做一个实验，大概是用IL2刺激人PBMC后，检测人PBMC中NK细胞的STAT5磷酸化程度。

    我这边使用的是Perm BufferIII进行透膜检测细胞中STAT5，使用BD的  BV421 Mouse Anti-Human CD56(NCAM16.2 )标CD56.
    现在出现的问题是，PBMC不透膜，CD56的分群非常好，但是固定透膜后，CD56基本上无法分开。
    站内有没有大神有过相关经验，或者通过哪些角度进行改进
    谢谢


不透膜

不透膜

透膜

niwanmao

FSC和SSC散点图比对一下，可能细胞都碎了。

有没有事先用BD Phosflow™ Fix Buffer I 固定？

DR-ing

谢谢老师回复
透膜的细胞是固定过的。
FSC和SSC散点图对比过，相同电压下细胞位置相同。
然后我用CD3和CD56标NK细胞，CD3的分群在透膜前后是没有问题的，仅CD56出现较大差异。

wmj123456

有没有可能跟CD56识别的位点有关系？它比较适合表面的染色，不太适合胞内染色？我只听说过CD3有这种表面和胞内染的，但是还没听过CD56也有。只是我个人的想法

DR-ing

谢谢回复
CD56胞内染色肯定是可以的
不过我也觉得是识别位点被破坏了，所以我正在寻找新的克隆号的anti-CD56的抗体
不知您那边是否有相关经验，哪个克隆号比较合适