做TIL时，到底选不选用梯度密度离心法？

immunology · 发表于 2020-3-26 19:12:10

本帖最后由 immunology 于 2020-3-26 19:13 编辑

很多文献不建议在做肿瘤浸润的免疫细胞，如TIL，甚至做PBMC流式的时候用ficoll或者percoll等密度分层液，说这样会丢失很多免疫细胞亚群，甚至对趋化因子受体等marker的表达水平都有影响^（1）。但是在做肿瘤浸润淋巴细胞的时候，如果不把肿瘤细胞通过密度梯度离心离掉，那么大部分流式收的events都应该是肿瘤细胞吧，是否会导致收的有用的数据量太小？
有什么比较好的方法可以解决这一问题？是否建议做TIL或者肿瘤浸润的其他免疫细胞实验时用梯度密度离心法？

参考文献：[1] Maecker H.T., McCoy J.P., Nussenblatt R. Standardizingimmunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol. 2012,12(3): 191-200

niwanmao · 发表于 2020-3-26 19:56:34

检测？
如果检测的话，为什么消化成单细胞之后，不直接标记和获取呢？

tiger · 发表于 2020-3-27 08:56:06

不建议用分离的方法，制成单细胞悬液后用CD45设门分析，既简单，又不丢细胞成份。

immunology · 发表于 2020-3-27 10:52:47

niwanmao 发表于 2020-3-26 19:56
检测？
如果检测的话，为什么消化成单细胞之后，不直接标记和获取呢？

老师的意思是，如果分选培养的话，可以考虑梯度密度离心？

immunology · 发表于 2020-3-27 11:00:32

tiger 发表于 2020-3-27 08:56
不建议用分离的方法，制成单细胞悬液后用CD45设门分析，既简单，又不丢细胞成份。 ...

谢谢老师回复，那您觉得如果做PBMC的话，裂完红直接检测好呢，还是不裂红直接用密度分层液分层后再检测好？

tiger · 发表于 2020-3-27 17:08:56

immunology 发表于 2020-3-27 11:00
谢谢老师回复，那您觉得如果做PBMC的话，裂完红直接检测好呢，还是不裂红直接用密度分层液分层后再检测好 ...

裂红效果好。

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