|
|
亲爱的FLOWER，加入流式中文网，一起讨论，一起学习，享受更多福利吧！
您需要 登录 才可以下载或查看，没有账号？加入流式中文网
×
流式检测细胞抗原表达，需排除死细胞，因为死细胞容易粘附抗体，产生大量非特异性信号，造成假阳性，干扰数据分析。这一方面在论坛内写过不少帖子，在此不再赘述。
现在商品化死活染料不少，但是大家可能感觉还是有点贵，所以用DNA结合染料排除死活，是成本相对较低的一个解决方案。
使用DNA结合染料区分死细胞的原理是基于这样的概念，即这些染料是细胞膜不可渗透的，因此不能进入具有完整膜的活细胞。 活细胞将这些染料排除在外，几乎不显示荧光，而染料在死细胞中则畅通无阻，因此荧光能够染上。
但是需要注意的是，随着孵育时间的延长，染料（例如PI和7-AAD）可以被吸收到活细胞中，因此应在分析之前即时添加这些染料（控制10分钟内，一般1～2分钟即可）。
另外一点需要注意的是，DNA结合染料不能用在固定或破膜的细胞上，就是说你做胞内或核内抗原检测的时候，就不能用DNA结合染料区分死活，此时就必须买适合固定/破膜细胞的那些商品化染料。
可用于区分死活的DNA结合染料主要有PI、7-AAD、TO-PRO-3、PY等，具体的浓度、用量、用法如下：
1. 将500μL细胞悬液（1-2×10E6个细胞，保证未固定）添加到流式管中。
2. 加入溶解在PBS中的DNA结合染料，各种染料浓度和用量分别是 PI（5μL，浓度200μg/ mL）、7-AAD（4μL，浓度250μg/ mL）、TO-PRO-3（4μL，浓度250μg/ mL）、PY（5μL，浓度200μg/ mL）。
3. 在冰上孵育细胞至少5分钟。
4. 通过流式细胞仪获取和分析细胞。
结果示例：
图片来源：Blizard Institute - Queen Mary University
|
|
发表于 2020-4-23 18:53:36
发表于 2020-5-2 16:50:16
浙ICP备17054466号-2