补偿调节问题

haohaoxuexi

各位老师好，自学流式中，关于补偿调节有个疑问：各荧光通道的单染管是否必须使用该实验中真实使用的抗体，可用该细胞群上其他表面分子的相同荧光抗体进行补偿调节吗？比如我用BV421-CD3、APC-CD4、FITC-CD8，那FITC补偿管是否可用FITC-PD1？（已知PD-1抗体在T细胞上高表达）

niwanmao

1、发帖请务必发在[技术问答](https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?gid=37)版块下的子版，不要发在分享版块。本次先转移过去，下不为例哦。
2、CD8 FITC 比PD-1 FITC更适合调节补偿，PD-1并不是在所有T细胞上都会表达，只有耗竭的T才会有出现。  同一荧光素是可以替代调节补偿，但是，首先荧光素要完全一致（例如FITC就不能替代Alexa Fluor 488），其次，尽量选择高表达的分子（如这里的CD8就比PD-1更强更适合）。

haohaoxuexi

niwanmao 发表于 2022-3-7 07:33
1、发帖请务必发在[技术问答](https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?gid=37)版块下的子版，不要发在分享 ...

谢谢倪老师。
情况是这样的，我用流式是做受体占位，需要加入没有标记的抗靶点的抗体药，再加入二抗进行检测；相当于间接法测细胞表面靶点，二抗是抗药物的，不能直接结合到细胞上，因此二抗的荧光是无法做补偿单染管的，必须找个替代抗体。
还想问您一下，如果我在测试阶段固定了电压、补偿等，那下一次使用相同的条件做实验时，是否可以不带单染管，而使用上一次的参数？

niwanmao

haohaoxuexi 发表于 2022-5-11 23:32
谢谢倪老师。
情况是这样的，我用流式是做受体占位，需要加入没有标记的抗靶点的抗体药，再加入二抗进行 ...

二抗不管靶点是什么，其Fc段可以与补偿微球结合，故可用补偿微球调节补偿。

半年y

你这个配色很简单，不太需要设立单染调补偿

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半年y 发表于 2022-5-13 18:11
你这个配色很简单，不太需要设立单染调补偿

表示认可，但是也得看工艺的要求，如果单纯的研发，可以直接检测管来调节