检测胞内分子，固定破膜后细胞表面抗原的阳性率增加

天天向上 · 发表于 2022-4-22 10:03:09

大家好，我在检测胞内的Ki67时，对比了一下未固定破膜和固定破膜（BD Fixation/Permeablization Kit）前后，细胞表面的抗原（TCR和自己表达的一个蛋白），发现固定破膜后细胞表面的抗原阳性率比没有固定破膜的高2~5%。想问一下各位知道其中的原因吗？谢谢！

niwanmao · 发表于 2022-4-22 16:20:05

分群清楚吗？如果分群不清，是否有设置对照？

天天向上 · 发表于 2022-4-22 17:36:40

niwanmao 发表于 2022-4-22 16:20
分群清楚吗？如果分群不清，是否有设置对照？

所有组的分群都很清楚

niwanmao · 发表于 2022-4-22 19:20:47

天天向上发表于 2022-4-22 17:36
所有组的分群都很清楚

那么CV是多少？

Climber · 发表于 2022-4-23 11:26:22

其实感觉这种情况没法解释
固定破膜比未固定破膜 FSC/SSC会受到一些影响，简单来说就是细胞会变小，圈门的位置可能需要改变

半年y · 发表于 2022-5-13 18:17:41

会的，实际中我也经常遇到，比如我固定破膜样品的CD45阳性率相对仅表染的细胞会有较大差异，原因我至今没想清楚

范晋波 · 发表于 2022-5-18 14:18:30

考虑因素：1.圈门问题；2.固定破膜肯定会丢失破裂一部分细胞，可能会造成基数变小，比例升高；

如果有人呼唤 · 发表于 2022-10-8 09:30:49

半年y 发表于 2022-5-13 18:17
会的，实际中我也经常遇到，比如我固定破膜样品的CD45阳性率相对仅表染的细胞会有较大差异，原因我至今没想 ...

您好，我现在在做小鼠脾脏和肿瘤细胞也发现破膜后相比于表染CD45+细胞明显变少，请问您是如何解决这个问题的呢？谢谢

半年y · 发表于 2022-10-10 13:48:44

如果有人呼唤发表于 2022-10-8 09:30
您好，我现在在做小鼠脾脏和肿瘤细胞也发现破膜后相比于表染CD45+细胞明显变少，请问您是如何解决这个问 ...

我最后并没有得到很好的解释，应该还是固定破膜过程中细胞形态，还有细胞丢失等原因，但并不影响我的细胞分群和后续分析。

lukequ · 发表于 2023-6-30 00:33:18

新手想问一下CV值是什么意思

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[结构和原理] 检测胞内分子，固定破膜后细胞表面抗原的阳性率增加