检测细胞株膜蛋白可以加多聚甲醛固定吗？

myslimshady · 发表于 2022-6-27 12:24:16

本帖最后由 myslimshady 于 2022-6-27 12:37 编辑

老师们好，

我打算检测肿瘤细胞株钙网蛋白在细胞膜表面的暴露情况，这个蛋白是胞浆和细胞膜都有，我只想测细胞膜上的钙网蛋白，

请问样本可以用多聚甲醛固定吗？没固定没染出来，固定了以后染出来了，但是固定了以后染的都是死细胞，担心通透性增加导致染的很多都是细胞内盖网蛋白，进而导致没有说服力。

整个过程没有用Triton等打孔剂。

niwanmao · 发表于 2022-6-27 16:41:40

一般低浓度多聚甲醛固定，只是固定膜蛋白，不会破膜。所以染的还是表面蛋白。
但是你所说的固定后染出来，我是有点怀疑是固定引起的非特异性增高，并非真阳性。

myslimshady · 发表于 2022-6-28 20:50:42

niwanmao 发表于 2022-6-27 16:41
一般低浓度多聚甲醛固定，只是固定膜蛋白，不会破膜。所以染的还是表面蛋白。
但是你所说的固定后染出来， ...

谢谢倪老师解答，现在衍生出两个问题
第一个是，这个非特异性增强，也就是假阳性应如何排除？
第二个是，与未封闭比，荧光强度增加了100倍左右，这个可以排除假阳性吗？
谢谢老师

niwanmao · 发表于 2022-6-28 21:02:22

myslimshady 发表于 2022-6-28 20:50
谢谢倪老师解答，现在衍生出两个问题
第一个是，这个非特异性增强，也就是假阳性应如何排除？
第二个是， ...

将FCS文件打包放上来看看。

myslimshady · 发表于 2022-7-9 16:00:34

niwanmao 发表于 2022-6-27 16:41
一般低浓度多聚甲醛固定，只是固定膜蛋白，不会破膜。所以染的还是表面蛋白。
但是你所说的固定后染出来， ...

请问老师，百分之4多聚甲醛算低浓度嘛？不会破膜吧？

niwanmao · 发表于 2022-7-9 21:12:24

myslimshady 发表于 2022-7-9 16:00
请问老师，百分之4多聚甲醛算低浓度嘛？不会破膜吧？

2%是低浓度，多聚甲醛不会破膜

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[标本处理] 检测细胞株膜蛋白可以加多聚甲醛固定吗？