single cell 和CD25+FoxP3- 在 in vitro Ti-Treg

hebiorange

请教一下，in vitro TGFb induce Treg, 最后收细胞的时候上流式，发现两个问题，第一个是在圈单细胞的时候，分的不好，
第二个是，有一群CD25+FoxP3- 在下面飘着，不知道是什么，是流式上机的时候，标本处理不好呢？希望老师给解答一下。

niwanmao

这个单细胞怎么分成了三群，有点怪 。
单细胞门，我认为最上面这群才是粘连体，因为粘连的细胞，H不变 而A增大。

hebiorange

niwanmao 发表于 2022-6-27 16:19
这个单细胞怎么分成了三群，有点怪 。
单细胞门，我认为最上面这群才是粘连体，因为粘连的细胞，H不变 而A ...

倪老师，有什么好的建议么？ 难道和破膜有关么？没有诱导前上机，单细胞这块没有这样子，怎么避免这类问题，发现这批样本中，细胞多的时候，就容易出现这个， 上机前过一遍滤网会不会好一点？ 还有就是 最后一个图里， CD25+ Foxp3- 那里飞的一群，也很异常。谢谢倪老师解答

niwanmao

hebiorange 发表于 2022-6-27 16:27
倪老师，有什么好的建议么？ 难道和破膜有关么？没有诱导前上机，单细胞这块没有这样子，怎么避免这类问 ...

有可能。
你可以通过与未破膜的样本进行比对，确认单细胞应圈哪群。
CD25+foxP3-那些信号是正常的，只是补偿未调整到位而已。