T细胞CD44和CD62L染色

zhouby701

我们的实验想分析CD8T细胞亚群，但是CD44和CD62L 一直染不好，请大家帮我们分析一下，谢谢。

小鼠CD44CD62L

魂断蓝桥

也就是说在做实验的这个100ul体系中 主要是看体系里面的抗体浓度，并不是看加入抗体的质量吗？

facetodog

不懂为啥收这么多细胞数

niwanmao

苏沁沁 发表于 2019-7-29 08:48
倪老师、染色为什么也和体积有关呢、抗体加足量的话、体积大点不可以吗 ...

之所以与体积有关，是因为浓度，浓度＝抗体量/溶液体积，在抗体量固定的时候，体积保持恒定，方能使抗体浓度保持恒定，染色体系才能稳定。滴定就是确定最佳浓度。

苏沁沁

niwanmao 发表于 2013-8-17 21:20
从图形上看，CD3阳性群分不开，CD8虽然分开了，但S/N比不高。所以我在担心你所用的其它抗体量可能亦存在不 ...

倪老师、染色为什么也和体积有关呢、抗体加足量的话、体积大点不可以吗

niwanmao

行棋无悔 发表于 2019-7-25 11:42
老师您好！请问染色体积用50ul是不是比100ul的效果好，尤其是对胞内染色。我一直比较困惑这个问题 ...

不是越小越好，而是要根据抗体适当的浓度（最佳浓度）

行棋无悔

niwanmao 发表于 2013-8-21 16:19
抗体的稀释液有专门的配方，你如果随意用PBS稀释我担心效果没法保证。现在1ul、2ul加样都不是问题，关键 ...

老师您好！请问染色体积用50ul是不是比100ul的效果好，尤其是对胞内染色。我一直比较困惑这个问题

yangyangyang

我想请问一下，您是用CD44和CD62L检测什么分子呢？

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-8-21 16:10

                               
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最主要是我们每次做流式用的抗体种类比较多，有些抗体加的量都不一样，有的不到1微升/test。我看到别的同 ...

抗体的稀释液有专门的配方，你如果随意用PBS稀释我担心效果没法保证。现在1ul、2ul加样都不是问题，关键还是操作的手法上。
50ul里面还是要有1×10E6细胞的

zhouby701

niwanmao 发表于 2013-8-21 12:28

                               
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2ul应该还好加的啊，我们平时经常加2ul的量，关键还是手法。还是不要稀释，染色体积减少到50ul试试 ...

最主要是我们每次做流式用的抗体种类比较多，有些抗体加的量都不一样，有的不到1微升/test。我看到别的同学是把抗体稀释到一定的浓度，每支抗体都是10微升/test，这样方便操作。另外，您指的50ul的染色体系里面也是1*10e6细胞数目吗?

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-08-21 10:55:06

                               
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谢谢老师的指导，您的意思是我们的抗体加的少了，染色的体系又有点大吗？我们这个要检测的组合总共有7个m

2ul应该还好加的啊，我们平时经常加2ul的量，关键还是手法。还是不要稀释，染色体积减少到50ul试试