胰酶消化制备样品，对细胞的表型什么的有影响吗

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到底胰酶等制备方法对细胞表型和功能有没有影响

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流式书上关于样品制备有提到，可以用胰酶处理流式样品；而有的人认为不能用胰酶处理流式样品，因为它会影响表型或者功能

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niwanmao 发表于 2013-10-30 22:11

                               
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这个投票的两个观点其实应该综合到一起，而不应该是对立的。
应该说，胰酶消化对样本制备出的单细胞悬液活 ...

既然它影响标记，那我们检测样本，发现细胞标记变化的时候，有可能就是因为胰酶的影响，而出现假阳性或假阴性。对吗？
特别是阳性标记或者阴性标记不是特别明显的时候

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niwanmao 发表于 2013-11-1 11:33

                               
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不是这个意思，而是由于胰酶对细胞的损伤，导致较多细胞死亡或细胞膜受损，故容易出现非特异性染色。不过 ...

就是说，其实胰酶不会对细胞表面标记产生影响，对吧

dragonhzqsmmu

个人感觉只要是酶消化都会对表面标志有所影响，只不过随着选择的酶的种类、消化时间、温度等条件的影响对待测分子的影响不同而已，看老外文献上是有过类似的摸索的

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dragonhzqsmmu 发表于 2013-11-4 14:54

                               
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个人感觉只要是酶消化都会对表面标志有所影响，只不过随着选择的酶的种类、消化时间、温度等条件的影响对待 ...

但又不能不用胰酶消化，怎么办呢，特别是染色都比较dim的情况下，如何是好

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niwanmao 发表于 2013-11-4 18:53

                               
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感谢@dragonhzqsmmu 站友的分享，确实跟酶有些关系。我将该文中的相关章节摘录如下：

To separate indiv ...

那胰酶的影响有多大呢

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niwanmao 发表于 2013-11-5 09:53

                               
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至少在我帮研究生做的那些实验中，没注意到。只需排除死细胞即可。

上面这篇文章，我觉得一方面他们研究 ...

我的一篇文章里面，一个外导问了我这么一个问题。我是被逼的

dragonhzqsmmu

给个建议，不知道对不对，试试美天旎的组织粉碎仪器，记得BD公司也有类似的产品，好像基本上依赖物理作用，http://www.biomart.cn/news/16/64601.htm

不过这个的耗费估计不小（仪器和一次性使用耗材，我们之前也想用，不过太贵了，用不起啊），大部分的文章还是用的酶消化的方法，严谨的话条件可以摸索一下，比如试试比胰酶效力温和的胶原酶，或者几种胶原酶的混合制剂或者小比例胰酶加大比例的胶原酶，胶原酶的选择需要结合你分离实体样本的成分来确定

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-11-7 11:36

                               
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组织研磨器是只针对组织团块，对于培养的贴壁细胞还是只能用胰酶消化了。

我们平时在临床上都是用BD的me ...

我刚想回复BD的组织处理器的链接，http://www.bdbiosciences.com/nvC ... ts%20and%20Software

只能说管理员真乃土豪也，当时问过BD公司的这个东东的报价，立马熄火，开玩笑的