Purdue邮件列表中，East Carolina University的Debajit Bhowmick问道：

我很想知道补偿微球是如何制作的。我估计它们表面涂有一些可以与大多数抗体结合的蛋白质。但这是一种什么样的蛋白质，制造商如何让它们在微球上长时间保持稳定？

澳大利亚的Simon Monard做了相当明确的回复（我们在编译时做了一些内容上的润色）：

有不同的捕获微球。
大多数用的是4.5um羧基微球，一般表面包被了多克隆抗 Kappa 抗体，因此可以结合各种抗体的kappa链。
也可以包被Protein G 或类似的东西，这类效果可能会更好一些。
微球越大，就可以结合越多的抗体，那么荧光强度肯定会越高。
我一直在使用 4.5um 羧基微球包被多克隆抗大鼠 IgG 或抗小鼠 IgG，制作自己的捕获微球。 加入商品化防腐剂，微球可以在冰箱中存活数年而不会变质。

具体的方法，Simon Monard在今年4月份已发表在Cytometry A杂志上了，文章讲的是用微球结合荧光蛋白、羊抗大鼠IgG、羊抗小鼠IgG。主要用的是polylink protein coupling kit（Polysciences Inc ，目录号24350-1，包含了偶联缓冲液、储存缓冲液和最关键的碳二亚胺 (EDAC)）、4.8um羧基微球。简单步骤我们编译分享如下，希望能给FLOWER带来帮助：

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看了上面的原理和步骤，是不是觉得荧光补偿微球其实一点也不神秘吧？

参考文献：Monard S. Building a spectral cytometry toolbox: Coupling fluorescent proteins and antibodies to microspheres [published online ahead of print, 2022 Apr 7]. Cytometry A. 2022;10.1002/cyto.a.24557. doi:10.1002/cyto.a.24557

倪老师，上面提到补偿微球的一种原理是，它结合了抗 Kappa 抗体，因此可以结合各种抗体的kappa链，抗体的轻链还有lambda，荧光抗体有见过带lambda的吗，那如果是这种的轻链，就没有对应的补偿微球了？而且我看BD的补偿微球还有种属的要求，我理解的是，把染色的荧光抗体作为一抗，譬如它的host是大鼠，那么选择补偿微球的时候，就要选择抗大鼠的，此时的这个抗体可以作为二抗？

wmj123456 发表于 2023-7-25 12:11
倪老师，上面提到补偿微球的一种原理是，它结合了抗 Kappa 抗体，因此可以结合各种抗体的kappa链，抗体的轻 ...

在抗体中确实存在两种类型的轻链，λ和κ。一般免疫球蛋白要么有κ链，要么有λ链。具有λ或κ轻链的抗体之间未发现功能差异，
在5大类抗体中的任何一类中均可发现任一类型的轻链。两种类型轻链的比例因种属而异。在小鼠中，κ与λ的平均比值为20:1，在人类中为2:1，在牛中为1:20。

由于我们平时用的基本上均为小鼠来源的抗体，所以采用抗kappa抗体，基本上都能结合，就够用了。