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[淋巴细胞相关] 请问混合培养的两种细胞可以使用同一荧光通道吗?

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 楼主| 发表于 2022-9-19 12:24:06 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
在混合淋巴细胞培养中,刺激细胞(DC)本身带有GFP荧光,请问反应细胞里的标志物(T细胞)可以再选择FITC通道的荧光吗?

我现在是觉得可以通过FSC/SSC再加上表面标志圈门,可以很明显得把两种细胞区分开来,应该可以使用相同通道的荧光?
希望大家能帮忙指点一下

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发表于 2022-9-19 12:37:43 | 显示全部楼层
分出两群细胞只是第一步,关键是如果用了同一通道的荧光素,如何衡量GFP+细胞的该抗原表达率呢?
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 楼主| 发表于 2022-9-19 12:40:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-9-19 12:37
分出两群细胞只是第一步,关键是如果用了同一通道的荧光素,如何衡量GFP+细胞的该抗原表达率呢? ...

谢谢老师的回复,我现有的是FITC通道的CD25抗体,用来检测Treg,请问可以这样设计实验吗?
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发表于 2022-9-19 15:27:29 | 显示全部楼层
jq2560775 发表于 2022-9-19 12:40
谢谢老师的回复,我现有的是FITC通道的CD25抗体,用来检测Treg,请问可以这样设计实验吗? ...

不建议这样做,因为没办法确定CD25的阳性率,也们办法确定CD细胞的GFP阳性率。
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发表于 2022-9-19 18:32:16 | 显示全部楼层
jq2560775 发表于 2022-9-19 12:40
谢谢老师的回复,我现有的是FITC通道的CD25抗体,用来检测Treg,请问可以这样设计实验吗? ...

光谱流式是能分开GFP和FITC的,但是常规流式,这两种荧光素被认为是一样的,如果FITC通道出现荧光,你认为是GFP发出的还是FITC的呢?
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发表于 2022-9-20 08:30:11 | 显示全部楼层
你的检测对象应该是T细胞,就是不关注刺激细胞的信息(不知道是不是这样?),我觉得你试试看,做一个不加CD25-FITC的空白管,就只有混合细胞,在FSC/SSC只圈淋巴细胞群,看是否会有FITC信号,要保证刺激细胞不干扰淋巴细胞。个人愚见
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