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[流式分选] 流式分选后培养问题(大肠杆菌)

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 楼主| 发表于 2022-9-22 22:47:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星


目前操作:阳性菌/阴性菌=1:100(大肠杆菌) ,混合菌经流式分选后,直接涂平板,挑单克隆进行菌落PCR验证


问题:发现挑的单克隆,既有阳性菌也有阴性菌,这是什么原因?   分选后的大肠杆菌直接涂平板的操作是不是存在问题?  请教大师

特殊现象:由于参与分选的菌是经蛋白表达过的,分选后的菌涂在平板上单克隆 菌的颜色泛白,且表面不光滑。


请教一下大师,谢谢!

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是否启动单细胞分选模式,每个孔一个菌,分开来培养?
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发表于 2022-9-22 22:47:09 | 显示全部楼层
wh21211314 发表于 2022-9-23 09:22
分选的指标是Ratio值,阳性菌和阴性菌差别不是很明显,所以会有一些阴性菌被分选出来。我的阴性菌也是有 ...

是否启动单细胞分选模式,每个孔一个菌,分开来培养?
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发表于 2022-9-23 09:15:07 | 显示全部楼层
是否分选的指标,无法分出纯粹的阴性菌或阳性菌?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2022-9-23 09:22:18 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-9-23 09:15
是否分选的指标,无法分出纯粹的阴性菌或阳性菌?

分选的指标是Ratio值,阳性菌和阴性菌差别不是很明显,所以会有一些阴性菌被分选出来。我的阴性菌也是有荧光的,所以可能会分选出来有假阳性。  但是现在的问题就是,如何能知道分出来的菌,有多少是阳性菌,有多少是阴性菌。从目前的结果来看,涂平板是不合适的,因为长出来的单克隆,既有阳性菌也有阴性菌。   谢谢老师
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 楼主| 发表于 2022-9-23 10:14:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-9-23 09:25
是否启动单细胞分选模式,每个孔一个菌,分开来培养?

好嘞,谢谢老师,我去试试!
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
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