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[标本处理] 荧光问题

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 楼主| 发表于 2022-9-27 05:43:13 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
多聚甲醛(PFA)可能会导致PE荧光检测下降吗?细胞染色后固定,固定15min后洗掉重悬,同一样本上机时间间隔时间3-4小时,PE荧光由3000降到1000,是什么原因

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发表于 2022-9-27 07:59:40 | 显示全部楼层
会的。所以对于多聚甲醛固定后的样本,对照也需要固定过。
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 楼主| 发表于 2022-9-27 20:52:10 | 显示全部楼层
都固定了,什么原理会导致荧光降低呀,正常染色后固定可以保存多久呀
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发表于 2022-9-27 21:09:57 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2022-9-27 20:52
都固定了,什么原理会导致荧光降低呀,正常染色后固定可以保存多久呀

固定后,对细胞表面很多蛋白质的构象或多或少都有影响,从而影响其结合能力。从而导致荧光变化。

染色后固定,可保存多久,应该视荧光淬灭程度而定,一般避光过夜是可以的。
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 楼主| 发表于 2022-9-29 19:14:30 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-9-27 21:09
固定后,对细胞表面很多蛋白质的构象或多或少都有影响,从而影响其结合能力。从而导致荧光变化。

染色后 ...

就是避光过夜了,第二天10点检测和14点检测,差的比较多
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发表于 2022-9-29 19:43:30 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2022-9-29 19:14
就是避光过夜了,第二天10点检测和14点检测,差的比较多

这可能说明你要检测的靶标特别容易受到固定影响,不适合固定后检测。那就只能当天做当天检测了。
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发表于 2022-10-3 10:54:11 | 显示全部楼层
不同靶标及不同克隆号的抗体对于多聚甲醛的耐受是不一样的,有些克隆号的抗体在用多聚甲醛处理后会发生信号下降的情况。可参考https://www.thermofisher.cn/cn/z ... considerations.html
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