流式分选后没有细胞？

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请问各位老师流式分选完成后显示分选大概有2×10^5的目的细胞，但是吸取部分培养基离心后涂片看不到细胞是什么原因呢？

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你这是用的BD的机器吧、
1. 确定细胞分选时，细胞打到收集容器中。
2. 分选结束后含有2.0x10^5 Cell的溶液体积是多少？

maxy

这次聚会有个老师提及，其中一个原因可能是最后的离心的EP管的问题。流式分选后细胞带电子会吸附在一些EP管的管壁导致离不下来。

Fusca

比较常见的问题有以下几种：
1.如上述，细胞没有打到接收管中。该问题可以用分选后液面是否上升来做简单的判断。如分选的细胞全部进入收集管，2x10^5细胞在BD Aria/Fusion分选中大约有500-700uL，即便用15mL管进行收集液面也会升高。如完全没看到液面的升高则说明细胞未成功进入收集管。一般是因为液路没调好产生的。

2. Drop delay错误或Ampl&Freq调节错误。该问题一般是仪器前期调试没有做好或没有清洁，分选的液路不稳，当分选液滴溅到电极板之后液路偏转不准确，该问题可以通过目视side stream window发现。如果机器比较老旧，有时是auto drop delay识别计算错误，可以手动drop delay确认以排除此问题。这个方面还有其他一些比较少见的情况也能导致，可以参见BD的用户手册。

3. 圈门错误。可能门逻辑有问题/冲突或者圈到了坐标轴以下导致分选的都是碎片没有分细胞。可以看此贴我做了解释https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=10805。实际分选发现，这一问题分选时并不一定显示的分选效率低/细胞少，但就是完全分不到东西。

4. 分选的是脆弱细胞，液路又没有校准到打到管的正中心，而且用玻璃的离心管，细胞被全部打碎了。

5. 分选的是大细胞，nozzle尺寸没选对，细胞都被挤碎了。

6.离心机问题（意外的常见），离心设置的不对或者离心力不够，细胞没离心下来；或离心速度太大把细胞离碎了。常见于实验室，很多学生会忘记看一下离心时机器设置是rpm还是rcf，直接把细胞离碎了。