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免疫分型标本处理中的细节

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发表于 2012-1-20 09:00:03 | 显示全部楼层 |阅读模式

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有些时候,我发现同一批处理的标本中,抗体的荧光表达发生变异,例如,我们做了6管,CD45-SSC设门的图,同一个标本应该改变不大,但是有时候会发现,1、2、3、5、6的都一样,偏偏4就CD45掉下去许多;或者成熟单核细胞应该CD11b高表达,但在图上却只能看到中等表达。。。。

什么原因呢?步骤都没问题啊。

今天,在两位同事处理标本时,我注意了一下,发现了两个细节:
1、加完抗体后,有几管有些许抗体粘在上样管上部。
2、加完标本,有几管标本(骨髓或者外周血)少量粘在上样管中部或上部。

这两个细节,均可能导致结果出现多多少少的异常。前者,可能会导致抗体量不足,后者,可能导致部分细胞没染上抗体。均会产生假阴性,导致结果的异常。

所以,建议大家在处理标本是,加完抗体和标本后,用700-800转/分,瞬时离心一下,将抗体和标本都离到底部,然后再震荡,这样才能保证抗体和标本的充分混合。
发表于 2012-8-16 13:48:37 | 显示全部楼层
如果是做胞内的标记,个人觉得在加胞内抗体前的洗涤去上清也很重要,一般用200g以上的离心力基本可以把细胞保留在管底的了,这时去上清液时需要“心狠手辣”的直接倒干净,然后在吸水纸上吸干残留的PBS(管一直处于倒置样),不然加胞内抗体时由于残留液体过多导致抗体浓度降低,会影响结合的效果。之前没有注意到这点,偶尔会有个别管会染不上,后来注意了一下,基本就都可以染上,结果也还比较稳定。

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发表于 2012-1-20 19:33:01 | 显示全部楼层
赞同,我在做的过程中也有时候会发现这样的问题
发表于 2012-2-1 15:14:44 | 显示全部楼层
我也遇见过,茅塞顿开。
发表于 2012-8-14 11:17:08 | 显示全部楼层
我用了同样的方法处理
发表于 2017-2-15 10:14:24 | 显示全部楼层
hmily 发表于 2012-8-16 13:48
**** 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽 ****

请教老师,加抗体前上清要尽量弃干还是留少许?
 楼主| 发表于 2017-2-15 13:59:26 | 显示全部楼层
柠檬果秋秋 发表于 2017-2-15 10:14
请教老师,加抗体前上清要尽量弃干还是留少许?

尽量去干净,但不可能完全去光的,就是倒过来,姿势不变,在纸巾上轻轻碰一下,将管口的液体吸干即可。
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