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[功能检测] 流式细胞仪定量分析大肠杆菌死亡率

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发表于 2017-7-25 11:01:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星未解决
我在做一个有杀菌功能的材料,实验以大肠杆菌为代表菌种。我想通过流式细胞仪确定其杀菌效果,初步想法是SYTO和PI双染来看活死细菌比例,想请问老师,这两种染料是否合适,浓度应该为多少合适?还有就是对于双染法要设置什么参数?由于初涉流式细胞术,没有查到详细的资料,麻烦老师指点迷津,谢谢!
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想做出这种结果


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发表于 2017-7-25 16:43:00 | 显示全部楼层
每个菌种都不同,Syto染料还是需要自己摸条件的,不过也可以参考说明书嘛。

PI的话,可以参考哺乳动物的条件看看:10ug/ml PI染液,加5-10ul,作用1分钟即可上机检测。
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发表于 2023-11-23 11:16:41 | 显示全部楼层
倪老师,说明书上用SYTO 9/PI染色大肠杆菌,是分为3群的,有背景噪音或者是过渡阶段的细菌。上面图中是明显分为2群,即活菌和死菌,我最近做的也是这个样本,也是这样的流式图,我觉得这是由细菌状态决定的,这个结果是合理的哈?
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发表于 2023-11-23 11:44:59 | 显示全部楼层
本帖最后由 wxd 于 2023-11-23 13:33 编辑

这种实验我之前经常做。SYTO9用量一般是正常接种,过夜培养细菌稀释50-100倍后,1mL细菌悬浮液加1微升浓度为5 mM的SYTO9。
死活细菌不一定会分为3群,如果细菌悬浮液中没有杂质时,是没有杂质群的。
至于你的结果准不准确,可以验证一下:取正常培养的细菌(一般认为都是活菌),取一部分煮沸杀菌,然后与活菌按照特定比例混匀,得到死细胞比例已知的样品,染色后上机检测,看与预期是否相符。

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